W e s t e r n B l o t结果条带
分析
Revised final draft November 26, 2020
W e s t e r n B l o t结果条带全面分析
1.空白
原因：比较多，如果单纯一张没有任何显色，最可能是一抗加成其他抗体，或者二抗种属加错了，比如兔的加成鼠的。

解决办法：仔细检查抗体是否加错，确认转膜没有问题。

上面的图片展示的是一点信号都没有，如果是这样大部分情况是抗体加错了。

如果中间出现了细微的条带，可能原因是蛋白上样量太少，一抗浓度过低，显色液失效。

另外如果转膜出现了问题，比如膜放反了，自然是一个白片。

2.高背景
原因：封闭不够好，一抗浓度高，洗膜时间和次数不够。

解决办法：降低一抗浓度，增加洗膜时间和次数。

3.非特异性条带
原因：一抗非特异性与蛋白结合
解决办法：更换一抗
4.条带中出现边缘规则的白圈
原因：电转中膜和胶之间存在气泡。

解决办法：转膜前去掉膜和胶之间的气泡
5.出现黑点和黑斑
原因：膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合
解决办法：封闭结束之后要洗。

6.条带拖尾
原因：蛋白量太大，一抗浓度和时间太长
解决办法：根据情况调整蛋白量，同时一抗浓度和时间也可以缩短。

7.出现非均一性背景
原因：膜可能曾经干过
解决办法：在每一步的操作过程中，都需要注意不要让膜干。

8.某个条带变形
原因：SDSPAGE胶中存在气泡或者某不溶性颗粒
解决办法：配胶过程中要小心，使用无杂质的液体。

另外配胶用的水，SDS，Tris缓冲液要注意不要有杂质。

9.条带呈哑铃状
原因：配置胶有问题，胶凝固后不均一
解决办法：把胶配好，不合格的胶坚决不用
10.最边缘条带弯曲
原因：电泳电流不均一
解决办法：换用新的电泳槽；不使用两边的两孔
其他问题
（1）蛋白分子量偏高或者偏低。

可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应。

（2）蛋白质降解。

蛋白质降解后很可能会在比原来位置低的地方出现主带，然后会出现一些其他带，最主要特点是所有的条带比正常的都低，并且条带模糊不清晰。

（3）所有条带连成一片没有间隔。

原因最可能是上样量过多，其次是样品弥散（比如电泳长时间停止样品弥散）。

（4）整个条带呈“︶”状：凝胶冷却不均一，电泳槽老化。

（5）整个条带呈“︵”：凝胶左右两头没有凝固好
（6）溴酚蓝拖尾：样品溶解不好。

（7）纵向的纹理：上样样品中存在不溶性颗粒
（8）溴酚蓝很粗：浓缩胶浓缩效果不好，可能是浓缩胶太短，或者是浓缩胶配错。

（9）在分离胶中跑不动：Tris-HClPH值不对，或者忘记加SDS。