实验材料
▪ 生理盐水、1%琼脂（用于制作琼脂扩散试 验平板）
▪ 已知传染性法氏囊病毒抗原、待检血清 ▪ 打孔器、微量加样器、枪头、酒精灯、搪
瓷盒等
实验步骤
▪ 制板：称取1g琼脂粉，加入100ml生理盐水， 煮沸使之溶解。待溶解的琼脂温度降至60℃左 右时倒入平皿中，厚度为2-3mm。注意勿产生 气泡。
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
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结果判定
用梅花孔检测抗血清的效价，操作时将抗原置 于中心孔，抗血清倍比稀释后置于周围孔，以 出现沉淀带的血清最高稀释倍数为该血清的琼 扩效价。
若凝胶中抗原、抗体是特异性的，则形成抗原 抗体复合物，在两孔之间出现清晰致密的白色 沉淀线，为阳性反应。若在72小时内仍未出现 沉淀线则为阴性反应。实验时至少要做一阳性 对照。出现阳性对照与备检样品的沉淀线发生 融合，才能确定待检样品为真正阳性。
▪ 扩散：加样完毕后，将琼脂板放于湿盒内， 保持一定的湿度，置于37℃温箱中扩散 24~48小时观察结果。
图1
结果判定ห้องสมุดไป่ตู้
▪ 用以检测抗原或比较抗原差异时，将抗血 清置中心孔，将待测抗原或需比较的抗原 置于周围相邻孔。若出现沉淀带完全融合， 证明为同种抗原；若二者有部分相连，表 明二者有共同抗原决定簇；若二条沉淀线 相互交叉，说明二者抗原完全不同。
免疫扩散实验（双向双扩散）
2010级生物技术第四组
实验目的
▪ 了解双向琼脂扩散的原理和用途。 ▪ 掌握抗体效价的测定方法。 ▪ 观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线。
实验原理
▪ 双向双扩散简称双扩散，此法是一种定性 试验。可溶性抗原与相应的抗体在琼脂凝 胶中各自向四周扩散，如果抗原和抗体相 对应，则在二者比例适当处形成白色沉淀 线；若抗原和抗体无关就不会出现沉淀线。 此试验可以检测抗原或抗体的纯度，滴定 抗体的效价，以及用已知抗原（抗体）检 测和分析未知抗体（抗原）。
双向免疫扩散凝胶染色图
注意事项
▪ 浇制琼脂板时要均匀、无气泡。 ▪ 孔要打得圆整光滑，边缘不要破裂。 ▪ 加样时应尽量避免气泡或加到孔外，以保
证结果的准确性。 ▪ 注意微量进样器每加一个样品之后，更换
枪头。
思考题
▪ 如何进行血清琼扩效价的测定？
▪ 打孔：待琼脂凝固好后用打孔器打孔，孔径和 孔距依不同疫病检疫规程而定，一般孔径 3~5mm，孔间距4~7mm。孔型多为7孔，中央 1孔，周围6孔（如梅花孔）。用针头挑出孔内 琼脂。
▪ 封底：将琼脂板无凝胶面在酒精灯火焰上轻轻 灼烧，用手背感受微烫即可。
▪ 抗体效价测定：用微量加样器于中央孔加 入已知抗原，于周围孔加倍比稀释的血清， 每个稀释度加1孔。加样时不要使样品外 溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结 果。