4.用灭菌吸管取2～3个适宜稀释度的稀释菌 液0.1ml，分别注入灭菌平皿内，每个稀 释度重复做两个平板，涂布均匀后，置 37℃，培养24-48h。
12
3
4
5
6
0.1ml
1
样本
0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml
123456
0.1ml
0.1ml
0.1ml
• 适用领域：
细菌菌落计数
▪直接法
✓血球记数板 ✓活菌染色：美蓝、吖啶橙、TTC
▪间接法
直接法—血球记数板
细菌计数板和血球计数板都用来侧微生物的总菌数。血球计数板用来测 较大微生物如酵母菌和霉菌孢子的总数，细菌计数板用来测细菌的总菌 数。两种计数板的构造相似，不同的是细菌计数板的深度仅为血球计数 板深度的1/5。
1.广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料 和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。 2.疾病诊断
*泌尿系感染性疾病的诊断------尿培养 3.细菌感染及药物治疗效果
*临床病人 *实验动物
3、菌落计算方法 （1）菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜 检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释 度的各平板平均菌落总数。
（2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定 标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数， 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状 菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
间 接 法—平板菌落计数法
浇注平板法
Байду номын сангаас
涂布平板法
• 方法：
1.以无菌操作方法用灭菌吸管吸取 0.9 ml 生理盐水，分别 加入6支灭菌EP管中。
2.以无菌操作方法吸取0.1ml充分混匀的待 检样本，注入盛有0.9ml灭菌生理盐水的 试管中，混匀成1:10稀释液。
3.吸取1:10的稀释液0.1ml注入盛有0.9ml 灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀 释液。按同法依次稀释成1:1000， 1:10000稀释液等备用。（如此递增稀 释一次，必须更换一支1ml灭菌吸管）
• 结果：
稀释度 菌落数 每毫升中 总活菌数
10-4
10-5
10-6
1 2 平均 1 2 平均 1 2 平均
总活细菌数（CFUs/ml）=某一稀释度的平均菌落数 ×10×稀释度
*注意事项见实验讲义