高效液相色谱仪期间核查操作规程
文件编码：版本号：02
目录
一、目的 (1)
二、适用范围 (1)
三、内容 (1)
四、附件 (5)
五、变更历史 (5)
一、目的
为了使高效液相色谱仪保持良好的运行状态，企业内部定期对仪器进行校准；本规程规定了公司高效液相色谱仪期间核查的项目、方法及周期，使质量部校准小组有章可循。
二、适用范围
本规程适用于公司高效液相色谱仪的期间核查工作。
三、内容
1.制定依据
1.1.《中国药典》2010年版二部
1.2.《高效液相色谱法操作规程》（C08-0128）
1.3.《液相色谱仪检定规程》（JJG705-2002）
1.4.《药品生产验证指南》（国家食品药品监督管理局）2003年版
2.通用技术要求
2.1.仪器外观
仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品系列号等标牌。
2.2.仪器电路系统
仪器电源线、信号线插接紧密，各开关、按键、旋钮等功能正常，指示灯灵敏，显示器正常。
3.计量器具控制
3.1.校准条件
3.1.1.环境条件
a.校准室应清洁无尘、无易燃、易爆、腐蚀性气体，通风良好；
b.室温在15-30℃，校准过程中温度变化不超过3℃（对示差折光检测器温度变化不超过2℃，室内湿度在10%-75%RH范围内；
c.仪器应平稳放在工作台上，周围无强烈机械震动和电磁干扰源，仪器接地良好；
d.电源电压为（220±22）V。
3.1.2.校准设备
a.秒表：分度值不大于0.1s；
b.分析天平：最大载荷应大于220g，最小分度值应小于0.01mg；
c.容量瓶：10ml 9个。
以上计量器具需经检定合格
3.1.3.标准物质
1×10-4、1×10-7萘/甲醇溶液
1×10-3丙三醇/水溶液
大豆油对照品（中检所）
4.校准项目、接受标准及周期（表1）
5.期间核查方法
5.1.外观检查
按2.1、2.2条的要求，用目视、手动检查
5.2.输液系统检查
5.2.1.泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差S R检查
按下表2的要求以纯化水为流动相，启动仪器，设定流量，待压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表2规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、式（2）、式（3）计算Ss和S
R
Fm=(W
2-W
1
)/ρ
r
·t 式(1)
S S =︱F-F
S
︱/F
S
× 100% 式(2)
S R =(F
max
-F
min
) /F × 100% 式(3)
式中: F
m
:流量实测值，ml/min ;
W
2
:容量瓶+流动相的质量，g;
W
1
:容量瓶的质量，g;
ρ
r
:实验温度下流动相的密度，g/cm3 ;
F
S
:流量设定值，ml/min;
T:收集流动相的时间，min;
F
max
:同一组测量中流量最大值，ml/min;
F
min
:同一组测量中流量最小值，ml/min ;
F: 同一组测量的算术平均值，ml/min；
5.3.检测器
5.3.1.紫外检测器、二极管阵列检测器
a.基线噪声和基线漂移
将仪器的各部分连接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，柱温35℃，流速为1.0ml/min，吸收度范围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线30分钟，计算基线漂移和噪声。
b.波长准确度
通过仪器诊断软件的波长校准功能进行测试，待测试通过后，在诊断软件界面打印校准报告。
报告中α线/656nm处校准的真实值与656nm之间的偏差即为波长校准偏差。
注：波长校准需要大约3.5min，在灯打开后的开始10min不能做，应为初始漂移将干扰测量。
此方法适用于agilent系列仪器
c.最小检测浓度
在（5.3.1中a）色谱条件下，注入20ul 1×10-7g/ml萘/甲醇溶液，记录色谱图，
由色谱峰高和基线噪声峰高，按式（4）计算最小检测浓度Ct
Ct=3·H
.C/H 式（4）
N
式中：Ct:最小检测浓度（g/ml）
H
:噪声峰高（m AU）
N
C:样品浓度（g/ml）
H:样品峰高（m AU）
d.定量重复性和定性重复性
将1×10—4g/ml 萘的甲醇溶液，注入高效液相色谱仪中，检测波长254nm，流动相为100%甲醇，流速1.0ml/min，柱温35℃，进样量20ul。
重复进样6次，计算相对标准偏差（RSD）。
5.3.2.示差折光检测器
a.基线噪声和基线漂移
采用C18色谱柱，将仪器各部分连接号，以HPLC用水为流动相，流速1ml/min，参比池充满流动相，灵敏度选择在最灵敏挡，接通电源，待仪器稳定后记录基线30min，计算基线漂移和噪声。
（试验中应特别注意，室温的波动不超过2℃）
b.最小检测浓度
在（5.3.2中a）色谱条件下，注入20ul 1×10-5g/ml丙三醇水溶液，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰高，按式（4）计算最小检测浓度Ct
c.定量重复性和定性重复性
在（5.3.2中a）色谱条件下，将1×10-3g/ml丙三醇水溶液注入高效液相色谱仪中，进样量20ul。
重复进样6次，计算相对标准偏差（RSD）。
5.3.3.蒸发光散射检测器
a.基线噪声和基线漂移
将仪器的各部分连接好，蒸发光漂移管温度为70℃，载气流速：2.6L/min流动相为正己烷:异丙醇：冰乙酸（98.9：1:0.1），流速为0.9ml/min，开机，待系统平衡后，记录基线30-40分钟，计算基线漂移和噪声。
b.最小检测浓度
在（5.3.3中a）色谱条件下，注入10ul 1×10-6g/ml大豆油对照品溶液（流动相溶解），记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰高，按式（4）计算最小检测浓度Ct
c.定量重复性和定性重复性
在（5.3.3中a）色谱条件下，注入10ul 1×10-4g/ml大豆油对照品溶液（流动相溶解），重复进样6次，计算相对标准偏差（RSD）。
6.期间核查后的评估与放行
6.1.期间核查结果应经过审核或评估，只有期间核查结果满足接受标准的仪器才能放行使用。
6.2.当期间核查没有在规定的日期前完成，或期间核查结果不合格时，仪器应放置“停用”标识。
6.3.当有下列情况发生时，应及时通知质量部QA经理根据公司的偏差处理程序进行偏差调查，并对使用该仪器所产生的实验数据进行相应评估：
6.3.1.定期期间核查结果超出接受标准；
6.3.2.超出期间核查期的仪器被使用时。
6.4.当有下列情况发生时，应重新对仪器进行校准：
6.4.1.经历重大维修，或更换关键部件时；
6.4.2.当氘灯使用寿命到期后更换氘灯，只需对检测器进行波长校准；
6.5.相关记录
《高效液相色谱仪期间核查记录》（F08-0107）
四、附件
无
五、变更历史
（注：可编辑下载，若有不当之处，请指正，谢谢!）。