腺病毒载体的优点
1.基因导入效率高，对人类安全； 2.宿主范围广； 3.基因转导与细胞分裂无关； 4.重组腺病毒可通过口服经肠道吸收、或喷雾吸入 或气管内滴注； 5.腺病毒载体容量较大，可插入7.5 kb外源基因；
腺病毒载体的缺点
1.不能整合到靶细胞的基因组DNA中。分裂增殖 快的细胞，导入的重组病毒载体，随分裂而丢 失的机会增多，表达时间相对较短。
基因添加或称基因增补（gene augmentation） : 通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达 的基因。 类型: 在有缺陷基因的细胞中导入相应的正常基因， 而细胞内的缺陷基因并未除去，通过导入正常 基因的表达产物，补偿缺陷基因的功能。 向靶细胞中导入靶细胞本来不表达的基因，利 用其表达产物达到治疗疾病的目的。
（2）受体介导转移技术
将 DNA 与细胞或组织亲和性的配体偶联， 可使 DNA具有靶向性。这种偶联通常通过 多聚阳离子（如多聚赖氨酸）来实现。多 聚阳离子与配体共价连接后，又通过电荷 相互作用与带负电荷的DNA结合，将DNA 包围，只留下配体暴露于表面。这样形成 的复合物可被带有特异性受体的靶细胞吞 饮，从而将外源DNA导入靶细胞。
（二）干扰RNA
1.RNA干扰现象
RNA干扰（RNA interference， RNAi）是一种由双链RNA诱发的基因 沉默现象。在此过程中，与双链RNA有 同源序列的信使RNA（mRNA）被降解， 从而抑制该基因的表达。
2.RNA干扰的机制
RNA干扰过程主要有2个步骤： （1）小干扰性RNA（siRNA）
逆转录病毒载体的主要缺点
随机整合，有插入突变、激活癌基因 的潜在危险； 逆转录病毒载体的容量较小，只能容 纳7 kb以下的外源基因。
（2）腺病毒(adenovirus，AV)载体
腺病毒是一种大分子(36 kb)双链无包膜DNA病 毒。它通过受体介导的内吞作用进入细胞内，然后 腺病毒基因组转移至细胞核内，保持在染色体外， 不整合进入宿主细胞基因组中。 腺病毒是人类呼吸道感染的病原体，但目前尚未 发现与肿瘤发生有关联。宿主细胞范围广，可感染 分裂和非分裂终末分化细胞，如神经元等。
该复合体可识别与siRNA有同源序列的mRNA，并在特异 的位点将该mRNA切断。
3.RNA干扰的应用前景
RNA干扰研究目前已经在功能基因组 学研究、微生物学研究、基因治疗和信 号转导等广泛领域取得了令人瞩目的进 展，使其在医学、生物学领域的应用有 着广阔的前景。
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2.宿主的免疫反应导致腺病毒载体表达短暂。 3.有两个环节可能产生复制型腺病毒。 4.靶向性差。
2.非病毒载体介导的基因转移系统
（1）脂质体介导的基因转移技术 脂质体介导的基因转移技术使用方便、 成本低廉。 基本原理:利用阳离子脂质体单体与 DNA混合后，可以自动形成包埋外源 DNA的脂质体，然后与细胞一起孵育，即 可通过细胞内吞作用将外源DNA（即目的 基因）转移至细胞内，并进行表达。
（五）基因免疫治疗
通过将抗癌免疫增强细胞因子或MHC基因 导入肿瘤组织，以增强肿瘤微环境中的抗癌 免疫反应。
二、基因转移 技术
基因转移(gene transfer)技术
1.病毒介导的基因转移系统。 2.非病毒介导的基因转移系统。
1.病毒介导的基因转移系统 病毒载体介导的基因转移效率较高， 因此它也是使用最多的基因治疗载体。 据统计，有72%的临床实验计划和71% 的病例使用了病毒载体，其中用得最多 的是逆转录病毒载体。
(1) 逆转录病毒载体
逆转录病毒载体的特点
①逆转录病毒包膜上由env编码的糖蛋白，能够被 许多哺乳动物细胞膜上的特异性受体识别，从而 使逆转录病毒携带的遗传物质高效地进入靶细胞。 ②逆转录病毒结构基因gag、env和pol的缺失不影 响其他部分的活性。 ③前病毒可以高效整合至靶细胞基因组中，有利于 外源基因在靶细胞中的永久表达。 ④包装好的假病毒颗粒（携带目的基因的重组逆转 录病毒载体）以芽生的方式分泌至辅助细胞培养 的上清液中，易于分离制备。
长双链RNA被细胞内的双链RNA特异性核酸酶Dicer切成 21-23个碱基对的短双链RNA，称为小干扰性RNA （small interfering RNA，siRNA）。
（2）siRNA与细胞内的某些酶和蛋白质形成复合 体，称为RNA诱导的沉默复合体（RNAinduced silencing complex, RISC)。
基因治疗的原理
内容提要
一、基因治疗的策略 二、基因转移技术 三、基因干预
一、lacement）
定义：指将特定的目的基因导入特定细胞，通过 定位重组，以导入的正常基因置换基因组内原有的 缺陷基因。 目的：将缺陷基因的异常序列进行桥正。
（二） 基因添加
（三）基因干预

基因干预（gene interference）: 采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者 通过破坏某个基因的结构而使之不能表达，以 达到治疗疾病的目的。
（四）自杀基因治疗
自杀基因治疗 : 恶性肿瘤基因治疗的主 要方法之一。 原理 : 将“自杀”基因导入宿主细胞中， 这种基因编码的酶能使无毒性的药物前 体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞 产生“自杀”效应，从而达到清除肿瘤 细胞的目的。
2. 受体介导反义 RNA 技转移 术
借助受体介导 DNA 转移方法把 DNA 换成反义 RNA ， 就可以实现受体介导的反义 RNA 的转移。
基本原理：将脱唾液酸血清类粘蛋白（ASGP） 与多聚赖氨酸（PL）共价连接，得到ASGP-PL复 合物，成为运载核酸的工具。ASGP-PL反义RNA 复合物可以专一性地被肝细胞表面的ASGP受体所 识别，并吞噬到肝细胞中，反义RNA 进入肝细胞 后，可被逐渐释放出来发挥作用。
（3）基因直接注射技术
不需要进行基因工程的繁琐操作，直 接将裸露基因DNA注入动物肌肉或某些 器官组织内。
三、基因干预
基因干预的种类：


1.反义RNA (antisense RNA)
2.干扰RNA (RNA interference)
（一）反义RNA
1. 反义RNA与基因表达调控 利用反义RNA对体外培养的细胞进行基因表 达调控，通常采用的方法有两种： （1）体外合成反义RNA，直接作用于培养 细胞，细胞吸收RNA后，发挥作用。 （2）构建能转录反义RNA的重组质粒，将 质粒转入细胞，转录出反义RNA而发挥作用。