肿瘤细胞的研究进展关键词：循环肿瘤细胞、研究进展、治疗学号:24520132204189姓名：蔡茂宇摘要：循环肿瘤细胞(circulating tumor cells, CTCs)是指进入人体外周血的肿瘤细胞。
是恶性肿瘤患者出现术后复发和远处转移的重要原因. 近些年, 随着技术的不断改进, CTCs检测作为一种新型的非侵入性诊断工具, 在早期发现患者术后复发与远处转移、评估疗效与预后等方面的应用价值已成为临床研究的热点. 本文简要综述近年CTCs检测的研究进展及其临床应用状况早在1869年, Ashworth发现血液中的一种血细胞同尸检发现的肿瘤细胞相似, 首次提出CTCs的概念. 目前CTCs定义为自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞. 进入循环未被清除的肿瘤细胞通过迁移、黏附、相互聚集形成微小癌栓, 并在一定条件下发展为转移灶. 近年来, 随着人们对肿瘤转移机制研究的深入, 以及检测技术的不断改进, CTCs的检测已取得了一些突破性的进展, 部分检测方法在稳定性、敏感性及特异性等方面均已较理想, CTCs的临床应用研究也已取得明显进展.目前CTCs的检测方法众多,根据检测原理可分两大类: 细胞计数法(cytometric methods)和核酸检测法(nucleic-acid based methods). 前者主要包括各种免疫细胞化学技术、流式细胞术等; 后者主要包括聚合酶链反应、逆转录聚合酶链反应及其各种改进的技术等.免疫细胞化学法(immunocytochemistry, ICC) ICC是指以显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和细胞化学的呈色反应, 对相应抗原进行定位、定性和定量测定的技术. 其检测的肿瘤标志物主要分3类: (1)上皮细胞角蛋白(CK), 如CK19、CK20; (2)上皮细胞膜特异性抗原, 如黏蛋白类, 包括EMA、HMFG、HEA-125等; (3)肿瘤相关糖蛋白(TAG). ICC检测的主要优点是可进行细胞大小和形态学的分析, 缺点是敏感性低, 只能从(1-10)×105个正常细胞中发现1个肿瘤细胞, 且应用免疫细胞化学法检测循环血中肿瘤细胞时, 每个载玻片上所能检测的细胞样本量仅为5×105个细胞, 难以从外周血中大量的单核细胞中检测出极少量的肿瘤细胞, 因此单纯应用免疫细胞化学法敏感性低,难以满足临床诊断需要. 为了能大范围检测外周血中稀少的肿瘤细胞,近年来又相继研发出光纤阵列扫描术(fiber array scanning technology, FAST), 激光扫描细胞计量仪(laserscanning cytometry, LSC)等, 能够在传统的显微镜技术基础上高速扫描并快速、准确的定位免疫荧光标记的肿瘤细胞, 使检测的敏感性和实效性显著提高.流式细胞术(flow cytometry, FCM) FCM是一项集激光、电子物理、光电测量、计算机、细胞荧光化学及单克隆抗体技术为一体的新型技术. 其优点是可以定量计数肿瘤细胞数量, 检测数据较精确, 还可对细胞进行多参数分析. 何成全等应用流式细胞术检测66例胃癌患者外周血中CK19、CK20的表达. 结果66例胃癌患者CK19、CK20、CK19+CK20阳性表达率分别为53.1%(35/66)、56.1%(37/66)、46.9%(31/66), 检测的阳性率与患者的TNM分期及转移程度相关, 且检测胃癌远处转移的敏感度高达90.0%. 认为应用FCM检测CK19、CK20的表达对胃癌微转移的诊断具有一定临床意义. 但由于FCM检测靶细胞的敏感度仅为1/1-10万, 而外周血中肿瘤细胞的数量常少于1/100万, 因此应用FCM 检测肿瘤细胞的价值在很大程度上依赖于可分析的细胞数量. 此外标本固定贮存及研究人员间的差异等因素的干扰, 以及价格昂贵、耗时较长等都限制了该技术的广泛应用.对于可开发的新治疗方案治疗转移性前列腺castration-resistant(mCRPC)加强监测和评估治疗反应的重要性。
因此,有一个未满足临床需要可靠的生物标记物,可用于指导治疗。
循环肿瘤细胞(ctc)是罕见的从原发性和转移肿瘤细胞摆脱沉积物到末梢循环,并代表执行非侵入性肿瘤采样的一种手段。
事实上,列举的CTC之前和之后的治疗表明,CTC负担与mCRPC患者的预测相关。
此外,研究已经显示了潜在的分子分析ctc的监测和预测患者对治疗的反应。
循环肿瘤细胞（CTCs）应用的最有前途的短期监测涉及肿瘤靶向治疗的发展，并需要这样的治疗肿瘤个体特征。
最近已提出大量的新的创新技术，以提高检测CTCs方法，具有非常高的灵敏度。
表征和识别需要非常敏感和特异的方法是能够分离的分离和培养和下游分析体外培养的可能性。
我们表明，它是可以从一个前列腺癌患者分离出人类CTCs，体外培养增殖后。
我们表明，通过metacell过滤装置的使用可满足上述所有要求。
505例局限性前列腺癌到目前为止被纳入研究。
在血液样本进行检测和55例患者。
报告成功的隔离ctc的前列腺癌患者,捕获细胞的阳性表达能力64.3%（18/28）。
格里森评分和T分期是不直接相关。
细胞，通过基于大小的过滤方法捕获，保持在良好的状态，任何抗体或溶解不受影响。
在过滤过程中，没有发生相互作用的抗体和抗原之间的CTCs的表面上。
这种生物的相互作用是特定的免疫方法。
该metacell装置提供到达处女和适用于随后的培养和单细胞分析的可能性。
这方面将在未来的临床试验对测试目标转移癌细胞表达的新的药物设计的重要影响。
除了CTC计数测量，有针对性的治疗也应包括对CTCS特定的治疗目标未来评估试验。
展望：大量实验已经证实CTC的检测有助于肿瘤的早期诊断、判断患者预后、评估抗肿瘤药物的疗效及制定个体化治疗方案。
与其他组织学标本如骨髓等相比,外周血标本容易获得,且创伤性小,是临床上常规检测较为理想的标本来源。
但是,CTC检测的临床应用仍然存在诸多亟待解决的问题:其一,目前尚未发现特异性非常高的肿瘤标志物,虽然多种标志物的联合应用能提高检测特异性,但寻找特异性高的肿瘤标志物对于CTC检测在临床应用的重要性不容忽视;其二,CTC在循环中释放是随机的还是具有周期性和规律性,目前尚无定论,因此外周血标本的采集时间应当进一步明确;其三,CTC脱离原发灶后,在随后的变异中有部分细胞获得了高转移潜能,导致这些CTC的基因表型不一定与原发灶一致,这为寻找新的CTC 特异性标志物提供了思路。
总之,逐渐积累的资料表明,CTC与肿瘤转移关系密切,具有巨大的潜在临床应用价值。
虽然到目前为止,CTC的检测缺乏统一的标准,并不能代替常规的影像学检查,而且检测费用高昂,但我们相信,随着肿瘤特异性标志物的发现以及检测手段敏感性与特异性的提高,CTC的检测将在人类战胜肿瘤的征途上写下新的篇章参考文献：1．Circulating tumor cells in localized prostate cancer: isolation, cultivation in vitro and relationship to T-stage and Gleason score.作者:Kolostova, Katarina;Broul, Marek;Schraml, Jan;Cegan, Martin;Matkowski, Rafal;Fiutowski, Marek;Bobek, VladimirAnticancer research卷:34 期:7页:3641-6 出版年:2014-Jul2.Circulating tumour cells-monitoring treatment response in prostate cancer.作者:Miyamoto,David T;Sequist,Lecia V;Lee,Richard JNature reviews.Clinical oncology卷:11期:7页:401-12DOI:10.1038/nrclinonc.2014.82 出版年:2014-Jul(Epub2014May13) 3．Characterization of Tumor Cell Dissemination Patterns in Preclinical Models of Cancer Metastasis Using Flow Cytometry and Laser Scanning Cytometry作者:Goodale, D (Goodale, David)[ 1 ] ; Phay, C (Phay, Carolina); Postenka, CO (Postenka, Carl O.)[ 1 ] ; Keeney, M (Keeney, Michael)[ 2 ] ; Allan, AL (Allan, Alison L.)[ 1,2,3,4 ]CYTOMETRY PART A卷: 75A 期: 4 页: 344-355 DOI: 10.1002/cyto.a.20657 出版年: APR 2009 4．Circulating tumor cells (CTC) detection: Clinical impact and future directions 作者:Paterlini-Brechot, P (Paterlini-Brechot, Patrizia); Benali, NL (Benali, Naoual Linda)CANCER LETTERS卷: 253 期: 2 页: 180-204DOI: 10.1016/j.canlet.2006.12.014 出版年: AUG 18 20075．Prediction of MYCN amplification in neuroblastoma using serum DNA and real-time quantitativepolymerase chain reaction作者:Gotoh, T(Gotoh, T);Hosoi, H(Hosoi, H);Iehara, T(Iehara, T);Kuwahara,Y(Kuwahara, Y);Osone, S(Osone, S);Tsuchiya, K(Tsuchiya, K);Ohira, M(Ohira, M);Nakagawara, A(Nakagawara, A);Kuroda, H(Kuroda, H);Sugimoto, T(Sugimoto, T) JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY卷:23期:22页:5205-5210DOI: 10.1200/JCO.2005.02.014 出版年: AUG 1 2005。