流动相 Hex/IPA=90/10
Hex/IPA/AcOH=90/10/0.1
碱性 样品
N
H2N
N
O
流动相
mV
mV 10.74
13.96
0.40
7.0
10.94
0.35
0.30
（无法分离 )
6.0
0.25
5.0
0.20
4.0
0.15
3.0
0.10 2.0
0.05
0.00
1.0
-0.05
0.0
-0.10
12.005 15.046
29.879
0
0.0
5.0
mV Detector A Ch1:220nm
125
3000
2000
2000
1000
1000
0
0
0
5
10
15
Minutes
Column: AY-H (4.6*150mm) Temp: 35℃ Flow:2.0ML/MIN Mobile phase: CO2/IPA/DEA
=85/15/0.1
Column: AY-H (4.6*150mm) Temp: 35℃ Flow:1.2ML/MIN Mobile phase: CO2/IPA/1-propylamine =85/15/0.1
气相色谱 （GC）
模拟移动床 (SMB)
手性色谱技术
逆流色谱 （CCC）
色谱法
薄层色谱 （TLC）
高效液相色谱 （HPLC）
大赛璐手性分析方法筛选与优化分析
超临界 (SFC)
对映体纯度测定方法及其比较
方法 旋光法
精度 低 (5%)
样品用量 几十毫克
说明 需要真实样品
非对映体异构体法 ＮＭＲ 色谱法
纤维素衍生物 CHIRALCEL® OD / OD-H/OD-3 CHIRALCEL® OJ / OJ –H/OJ-3 CHIRALCEL® OZ –H /OZ-3 CHIRALCEL® OA, OB, OC CHIRALCEL® OF, OG, OK CHIRALCEL® CA-1
反相
CHIRALPAK® AD -RH/AD-3R
其它 Chiral -AGP ® CROWNPAK® CR (＋), (－)
CHIRALPAK® OT(＋), OP (＋) CHIRALPAK® WH, MA (＋) CHIRALPAK ® QD-AX CHIRALPAK ® QN-AX
大赛璐固定相： USP\EP\中国药典
涂布型正相手性柱：
添加物的种类和用量
样品酸碱性 中性
碱性
添加物种类
不需要 二乙胺 (DEA)
(n-丁胺*1) (乙醇胺*2)
酸性
三氟乙酸 (TFA) 醋酸
*1 主要用于1级胺 *2 主要用于1级氨基醇
添加量
≦0.5％ 通常0.1％
≦0.5％ 通常0.1％
不同添加剂对手性分离的影响
mv
mv 12.240
14.853 mv
对于一些特殊的样品：酸碱添加剂同时添加，优化分离
2.225
mV Detector A Ch1:220nm
400
300
200
100
Column: OZ-H (4.6*150mm) Temp: 35℃ Flow: 1.0 ml/min
Mobile phase:hexane/IPA/DEA(75/25/0.1)
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Minutes
Minutes
流量：1.0mi/min. 温度：25℃、检测波长：ＵＶ（254ｎｍ）
Hex/IPA=90/10
Hex/IPA/DEA=90/10/0.1
业界之最 享誉全球
主要内容
手性色谱基础和大赛璐手性柱 涂布型正相手性分析方法开发 涂布型反相手性分析方法开发 化学键合型手性分析方法开发 常见手性分析问题与注意事项
液-液萃取法
手性色谱技术
生物催化法 不对称合成法
膜分离法
传感器法
手性分离方法
结晶法
毛细管电泳
色谱法
大赛璐手性分析方法筛选与优化分析
• 操作简单 • 不需要预处理 • 准确度高
引入手性环境 是实现手性分
离的前提
即可用于对映体的常规分 析，也可实现大规模制备
R
R
R
大赛璐手性分析方法筛选与优化分析
Daicel手性色谱柱一览表
正相
直链淀粉衍生物 CHIRALPAK® AD / AD-H/AD-3 CHIRALPAK® AS / AS-H/AS-3 CHIRALPAK® AY-H/AY-3 CHIRALPAK® AZ-H/AZ-3
高 (0.1%)
中等 (2%) 高 (0.1%)
需要其它的.手性化合 几十毫克 物来制备非对映体
几毫克 微克-毫克
需要位移试剂. HPLC、GC、SFC
大赛璐手性分析方法筛选与优化分析
手性色谱固ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ相法基本原理
对映体分离 示意图
R SR SR S
手
性 选
S S
SS SS
SS
择
剂
RR RR
R
R,S 消旋体 (racemate)
CHIRALPAK® AS –RH/AS-3R
CHIRALCEL® OD-RH/OD-3R
CHIRALCEL® OJ –RH/OJ-3R
CHIRALPAK® AY –RH/AY-3R CHIRALCEL® OZ –RH/OZ-3R
共价键合型
CHIRALPAK® IA/IA-3 CHIRALPAK® IB/IB-3 CHIRALPAK® IC/IC-3
mV
1.0
0.8
0.6
F 0.4
0.2
35
（没出峰 )
30
25
20
15
10
5
0.0
COOH
0
5
10 15 20 25 30 35 40
Minutes
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Minutes
流量：1.0mi/min.温度：40℃、检测波长：ＵＶ（254ｎｍ）
手性分析方法的建立和优化
分析条件优化流程图 (1)
1. 确认流动相中是否使用酸、碱添加剂
酸性
样品
中性
Hex/IPA/TFA =70/30/0.1
Hex/IPA =70/30
碱性
Hex/IPA/DEA =70/30/0.1
配制流动相
添加物在分离中的作用
mV 6.66
7.52
1.6
酸性
1.4
1.2
样品
mv
1200
1: 220 nm, 4 nm Retention Time
1000
800
600
400
200
0
1200 1000 800 600 400 200 0
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
20.0
Minutes
1: 220 nm, 4 nm
3000 Retention Time