检测机体血液中的T细胞数量 • E玫瑰花环试验 • T细胞酸性α醋酸萘酯酶测定 检测机体血液中T细胞转化功能 • 淋巴细胞转化试验 • 巨噬细胞移动抑制试验 • T细胞活化试验
第3节 血清学技术的应用及发展
• 疫病诊断
趋势
• 动植物生理活性物质研究
• 物种及微生物鉴定
• 动植物形状的免疫标记
• 生物制品研究
• 应用：用AbF检测抗原 （定性、定位）
• 特点：敏感，需荧光显微镜
免疫酶标记技术
• 原理： • 常用标记酶：辣根过氧化物酶（HRP） • 酶标抗体的制备：抗原免疫动物 抗体提取
IgG标记（戊二醛法、过碘酸钠法）标记抗体 的提纯标记抗体的鉴定 • 常用免疫酶技术：免疫酶组织化学染色技术、酶 联免疫吸附试验（ELISA）、斑点酶联免疫吸附试 验（Dot-ELISA） • 应用：
电解质
可溶性抗原 +免疫血清 出现沉淀现象
(血清蛋白、病毒) （抗体） 比例适合
沉淀原
沉淀素 比例不适合 不出现沉淀现象
容易过多
后带现象
（稀释）
• 环状沉淀试验 • 双向单扩散（辐射扩散） • 双向双扩散 • 免疫电泳 • 对流免疫电泳 • 火箭免疫电泳
环状沉淀试验 原理：小试管内，下层沉
淀素与上层沉淀原 在界面应，形成白 色沉淀环。 用途：检测皮毛中的炭疽 杆菌抗原（Ascoli试验）
放射免疫分析
• 原理：竞争性RIA 固相夹心RIA Ag*(F)+Ab Ag*-Ab(B)
+ Ag
Ag-Ab 标记用同位素：3H、125I、32P、35S 常用方法：液相放射免疫测定、固相非竞争放射 免疫测定 应用：用于药物、激素、酶、肿瘤抗原等测定
中和试验（病毒、毒素中和试验）
原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感
• 致病机理研究
• 分子生物学研究
• 发展趋势
第14章 凝聚性试验
第1节 凝集试验
• 直接凝集试验：颗粒性抗原 • 间接凝集试验：间接血凝实验、乳胶凝集
试验、炭素凝集试验
• 直接凝集试验：颗粒性抗原
基本原理：
电解质
颗粒性抗原 + 相应抗血清
抗原颗粒凝集
(细菌、红细胞)
比例适合
凝集原
凝集素
过多
前带现象
FMDV+抗血清 IB-RS-2单层细胞 细胞无病变CPU
用途：
1.用已知血清鉴定病毒——诊断病毒病 2.用已知病毒检测血清抗体——诊断病毒感染
，测定病毒免疫血清效价（中和价）
免疫检测新技术
• SPA免疫检测技术 • 免疫胶体金检测技术：免疫胶体金光镜染
色法、免疫胶体金电镜染色法、胶体金免 疫层析法等 • 免疫转印技术 • 免疫核酸探针技术
免疫荧光抗体技术
• 原理： 异硫氰酸荧光素（FITC）
原理：荧光素（F）+ Ab
AbF(FITC)
AbF + Ag Ag- AbF 紫外光 Ag- AbF
• 标记抗体的制备：抗原免疫动物 抗 体提取IgG标记标记抗体的提纯 标记抗体的鉴定
• 荧光抗体染色：标本制备染色（直接 法、间接发）
细胞免疫技术
一．E玫瑰花环试验 原理：人、猪、牛、羊等的T细胞膜上的CD2
是绵羊红细胞受体，马、猪的T细胞膜上的 CD2是豚鼠红细胞的受体。
E花环
T细胞的E玫瑰花环试验
二. 酸性α醋酸萘酯酶测定 原理：酸性α醋酸萘酯酶
醋酸萘酯
α萘酚+醋酸离子 +
六偶氮副品红
红色反应物
+ 甲基绿
红黑色颗粒 • 用途：1.鉴别T、B细胞；2.血液中T细胞计数
（稀释血清）
• 方法：玻片法、试管法、微量法
间接凝集试验：基本原理 • 可溶性抗原（或抗体）+惰性载体（聚苯乙
烯乳胶微粒、炭粒、绵羊红细胞等） 抗 原（或抗体）致敏载体
• 抗原（抗体）致敏载体+相应抗体（或抗原 ） 被动载体凝集（间接乳胶凝集、间接炭 素凝集、间接红细胞凝集等 ）
第2节 沉淀实验
第1节 免疫血清学技术概述
• 免疫血清学技术类型：凝集试验、沉淀试 验、标记抗体技术（免疫荧光抗体技术、 免疫酶标记技术、放射免疫测定）、中和 试验等
血清学反应的一般特点
• 特异性和交叉性 • 抗原与抗体结合机理 • 血清学反应的影响因素：电解质、温度、
酸碱度
带现象：前带 后带
第2节 细胞免疫检测技术
PHA+T细胞+3H-TdR
PHA+T细胞
转化
淋巴母细胞
转化淋巴母细胞（掺入3H NhomakorabeaTdR）
（无3H-TdR掺入）
液体闪烁仪测掺入 3H-T的脉冲数CPM
测CPM
计算转化刺激指数SI=试验管CPM/对照管CPM 特点：准确，需昂贵的闪烁仪
三．淋巴细胞转化试验 （一）形态学试验法 原理：PHA+T细胞（有PHA受体）
转化
大的淋巴母细胞
显微镜观察计算转化率
转化率=(过渡型细胞+母细胞)/200个淋巴细胞×100%
特点：简便，准确性较差
T细胞受PHA作用转化后的形态示意图
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（二）3H胸腺嘧啶核苷（3H-T）掺入法
原理：
试验管
对照管
染易感动物、鸡或鸭胚、细胞活性
例1
-NDV
9～11d鸡胚
24～48h鸡胚死亡
-NDV+抗血清 9～11d鸡胚 鸡胚不死亡
例2
口蹄疫病毒(FMDV)
4～7d乳鼠
乳鼠死亡
FMDV+抗血清
4～7d乳鼠
乳鼠不死亡
例3
FMDV 仔猪肾传代细胞(IB-RS-2)单层细胞 细
胞病变(CPU)：变圆、成串、空泡、变形、脱落、裂解