预测指标：1•抗氧化酶系统、MDA2. 可溶蛋白、超氧阴离子自由基3. 叶绿素、类胡萝卜素4. 可溶性糖5. 游离氨基酸6. 过氧化氢7. 谷胱甘肽、ASA1. 抗氧化酶系统、MDAA酶活测定试剂：PBS 缓冲液0.05M （pH 7.8 ）:取0.663g NaH2PO4 • 2H2O 16.384g Na2HPO4 • 12H2O , 加PVPIOg，并加EDTA或者EDTA盐，使其浓度为2mM，加蒸馏水定容至1L。
用前冰箱或冰上预冷。
样品制备鲜样0.1-0.5g加入1 ml磷酸缓冲液（0.05M , pH 7.8 ）,稍许石英砂，研磨成匀浆；移入10 ml离心管中，再用4ml磷酸缓冲液分两次洗涤研钵并全部转入离心管中；10000 X g 4 C下离心20 min ;上清夜贮于4 C冰箱中保存备测。
同时称取鲜样一份（0.1g左右）烘干称重。
试剂配制：实验步骤：2.725mL反应液+ 250uL蒸馏水+ 25uL酶液【样品管】2.75mL反应液+ 250uL蒸馏水（光照作为100%CK ）【照光对照管】2.75mL反应液+ 250uL蒸馏水（黑暗作为调零）【空白调零管】4000IX日光灯下反应20分钟，560nm比色。
反应温度25~35 C。
已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50 %为一个酶活性单位表示按下式计算SOD活性：SOD 总活性=（Ack —AE）*V/ （0.5*Ack*w*Vt ）（式中SOD总活性以鲜重酶单位每克表示，Ack为照光对照管的吸光度，AE为样品管的吸光度，V为样品液的总体积ml , Vt为测定时样品用量ml , w为样品鲜重g）探※※【空白调零管】可在光反应快结束前配制并用黑色纸或铝箔包裹以避光。
【样品管】和【照光对照管】在光反应快结束后至测定前应避光处理。
POD （入=470nm 比色）试剂配制： 1.5%愈创木酚（1.5ml愈创木酚，用蒸馏水定容到100 ml ）300uM 的H2O2 :取30 %的H2O2 1.53ml ，用蒸馏水定容到50 ml ;实验步骤：100ul酶液+2700ulPBS+100ul 愈创木酚+100ul H2O2 ，于普通比色皿，轻轻摇匀2-秒,A470动力学测定1分钟。
选择时间段较为笔直的曲线斜率为activity，此后测定均参考该时间段。
结果计算：POD(mmol/g)=activity X A X V X a/(E X w)A反应液总体积/ml ; V提取液总体积/ml ; a测定液体积/ml ; w材料鲜重/g ; E吸光系数/mM c m-1100ul酶液+2800ulPBS+100ul H2O2，于石英比色皿，轻轻摇匀2-秒，A240动力学测定1分钟。
选择时间段较为笔直的曲线斜率为activity，此后测定均参考该时间段。
结果计CAT (mmol/g)=activity X A X V X a/(E X w)算：APX （入=290nm 比色）试剂配制：7.5mM 的抗坏血酸（AsA）: 66mg AsA 用蒸馏水定容到50 ml ;300uM 的H2O2 :取30 %的H2O2 1.53ml ，用蒸馏水定容到50 ml ;实验步骤：100ul 酶液+2700ulPBS+100ul AsA +100ul H2O2 ，于石英比色皿，轻轻摇匀2-秒,A290动力学测定1分钟。
选择时间段较为笔直的曲线斜率为activity ,此后测定均参考该时间段。
结果计算：CAT （mmol/g）=activity X A X V X a/（E X w）B.丙二醛（MDA ）含量的测定（入=450 , 532 , 600nm 比色）试剂配制：5%三氯乙酸（TCA ）：25g三氯乙酸定容到500mL。
MDA反应液：2.5g硫代巴比妥酸，先用少量1M的氢氧化钠溶解，再用5%三氯乙酸定容到500mL。
实验步骤：0.5mL酶液+ 2.5mL反应液，沸水浴反应15分钟，立即冰浴，4800rpm 离心10分钟，上清转入新管，波长450,532和600下比色，MDA反应液调零。
结果计算：丙二醛含量（nmol.g-1 ） = （D532 —D600 ）*A*V/ （a*1.55*10-1*w ）式中A为反应液总量（mL）; V为提取液总量（mL ）; a为测量用提取液量（mL ）; w为材料鲜重（g ）。
1.55 X -10为丙二醛的umol/L消光系数（nmol/mL 消光系数）或者：MDA 浓度（umol/L）=6.45（D532 —D600）—0.56D450丙二醛含量（umol.g-1 ）= MDA 浓度X提取液总体积（ml）/组织鲜重（g）/1000 ----------植物体可溶性蛋白质含量测定比色原理:染料考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm ，后者在595nm 。
在一定蛋白质浓度范围内（0〜100卩g/ml ,蛋白 质-色素结合物在 595nm 波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。
故可用于蛋白质的定量测定。
蛋白质与考马斯亮蓝 G-250结合在2min 左右的时间内达到平衡， 完成反应十分迅速，其结合物在室温下1h 内保持稳定。
该反应非常灵敏，可测微克级蛋白质含量，所以是一种 比较好的蛋白质定量法。
【试剂】1、 65mmol/L 磷酸钾缓冲液（pH7.8）;如超氧阴离子自由基含量测定用。
称取 K2HPO4 3H2O （MW=228.22）9.1234g 和 KH2PO4（MW=136.09）3.406g ,蒸馏水定容至U 1L 。
或 K2HPO4 3H2O 4.562g 禾口 KH2PO4 1.703g ，蒸馏水定容到 0.5L 。
2、 考马斯亮蓝 G-250 :称取100mg 考马斯亮蓝 G-250溶于50ml 90% 乙醇中，加入85%（W/V ）磷酸100ml ,最后用蒸馏水定容至 1000ml 。
滤纸过滤后低温储存。
常温下可放 置一个月； 3、 磷酸（85% , W/V ）:也即商业磷酸（浓度》85%）。
直接用。
4、 0.15M 的NaCl （标准曲线用）：NaCI0.8766g 蒸馏水定容到 100ml 。
【方法】 1.标准曲线的绘制血清白蛋白（BSA ）先用0.15M 的NaCl 配制成2mg/ml 的原液。
表1 配制0〜1000卩g/m 血清白蛋白液 __________________________________________________管号1 2 3 4 5 6 牛血清蛋白原液（ml ） 00.1 0.2 0.3 0.4 0.5 磷酸钾缓冲液量（ml ） 1.00.90.8 0.70.60.5 蛋白质含量（卩g/ml ）0 200 400600 800 1000以上各管混匀后，各取 0.1ml 置2min ，在595nm 下比色， 于新的10ml 绘制标准曲线。
离心管内，各加 5ml 折衷： 考马斯亮蓝染液，混匀放表2 配制0〜1000 口 g/m 血清白蛋白液__________________________________________________管号1 2 3 4 5 6 牛血清蛋白原液（ul ） 0 10 20 30 4050磷酸钾缓冲液量（ul ）1009080 706050 蛋白质含量 （卩200 400600 800 1000以上各管混匀后，各加 5ml 考马斯亮蓝染液， 混匀放置2min ，在 595nm 下比色，绘制标准曲线。
2. 样品提取液中蛋白质浓度的测定样品制备参见超氧阴离子自由基含量测定方案。
取样品上清液0.1ml 于新的10ml 离心管内，各加5ml 考马斯亮蓝染液，混匀放置 2min ，在595nm 下比色。
3. 结果计算样品蛋白质含量（mg/g 鲜重）=C*V/W式中 C —查标准曲线所得每管蛋白质含量（ mg/ml ）; V —提取液总体积（ml ）;此为样品 提取液总体积为3ml ; W —取样量（g ）。
探测定以上3项目时，同时取部分同批剩余鲜样 称重后转入纸袋烘干称重。
2. 可溶蛋白、超氧阴离子自由基植物材料0.1-0.2g 左右（记录准确称量值）T 65 mmol/L 磷酸钾缓冲液（pH7.8）1ml 宀少许石 英砂T 冰上充分研磨T 转入离心管T 磷酸钾缓冲液洗涤研钵 2次，每次1ml 全部转入离心 管（样品提取液总体积为 3ml ） T 4 °C 10000r/min 离心15min T 取上清液转入新管标记低温 保存（待测液）。
A.超氧阴离子自由基（入=530nm ）比色原理：20 2.-+盐酸羟胺T NO 2-+磺胺T重氮化磺胺+ a-萘胺T偶氮化合物（粉红色,在波长530nm处有显著的光吸收）试剂准备：1、65mmol/L 磷酸钾缓冲液（pH7.8）;【不用磷酸钠】称取K2HPO 4 3H 2O（MW=228.22）9.1234g 和KH 2PO4（MW=136.09）3.406g ，蒸馏水定容到1L。
或K2HPO4 3H 2O 4.562g 禾口KH2PO4 1.703g，蒸馏水定容到0.5L。
2、10mmol/L 盐酸羟胺；称取盐酸羟胺（MW=69.49）0.06949g 蒸馏水定容到100mL3、12mol/L 乙酸：称取冰乙酸（MW=60.05）144.1g 蒸馏水定容到200mL4、58mmol/L 磺胺（12mol/L 乙酸为溶剂配制）；称取磺胺（MW=172.21）0.9988g ，用12mol/L 乙酸溶解并定容到100mL5、7mmol/L a-萘胺（12mol/L 乙酸为溶剂配制）；称取a-萘胺（MW=143.19） 0.100233g（0.1g ）,用12mol/L 乙酸溶解并定容到100mL6、三氯甲烷（氯仿）；7、NaNO2 （30umol/LNaNO2 ）（用65mmol/L 磷酸钾缓冲液配制和稀释）：称取NaNO2（MW=69.00 ）0.207g用65mmol/L 磷酸钾缓冲液定容到1L（此时NaNO2 浓度3mM）,从中吸取5ul，加65mmol/L 磷酸钾缓冲液495ul即可（30uM）。
其它25 , 20 , 15 , 10 ,5umol/LNaNO2 ，依此。
测定流程图空白调零组：磷酸钾缓冲液0.5ml T盐酸羟胺0.1ml T摇匀T 25 C水浴10min T冰浴T磷酸钾缓冲液0.5ml T摇匀T 25 C水浴20min T冰浴T磺胺1ml T%-萘胺1ml T摇匀T 25 C 水浴20min T冰浴T三氯甲烷3ml T 4 C 10000r/min 离心3min T上层水相测定A530。