二.大肠杆菌的培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
㈡培养大肠杆菌：
1.接种：
划线法 2.培养：
将接种后的平板倒置放入37℃恒温箱中培养2～3d
Q：为什么划线法接种能观察到单个菌落？
划线法接种时，使接种物逐渐稀释，最后 出现单个细菌，培养后出现单个菌落。
划线
划线法优点：
可对微生物进行分离、纯化，获 得单一菌落
4、调节pH
5、分装
6、灭菌
灭菌——高压灭菌
1.05kg/cm2、121℃，15—30min
灭菌锅
高压灭菌作用：杀死所有活的微生物及芽孢
（补充：倒“平板”）
超 净 工 作 台
约50℃
倒平板
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基
防止培养皿盖上的水珠滴落污染培养基
7、恒温培养（恒温培养箱）
培养基的配制
计算
加热熔化琼 脂（搅拌）
定容 调节PH至 7.2-7.4
称量
熔化
调节pH
分装
恒温培养
灭菌
倒入三角烧瓶，与 其他器具一起放入 灭菌锅 高压灭菌
（一般需要作无菌检查）
核心：保证无菌操作
超净工作台、酒精灯火焰旁操作
超净工作台
1、如何检验培养基是无菌的？
将未接种的培养基放在恒温培养箱中适宜条 件下培养2-3d，如果无菌落产生，则培养基 是无菌的。 2、常用灭菌方法有哪些？
微生物重点实验2 ——微生物的培养
•掌握划线法接种方法与作用
菌落是由单个细胞分裂形成的种群
补充：菌落 1.定义： 单个 菌体 固体培养基上
大量繁殖
子细胞群体
2.特征： 大小、形状、光泽度、 颜色、硬度、透明度等。 3.功能： 鉴定菌种的重要依据
常用工具图示
接种环
玻璃刮铲
微生物（如大肠杆菌）的培养：
用于培养基、培养皿、锥形瓶等 高压（蒸气）灭菌 灼烧灭菌 用于接种环等金属器具
3、消毒与灭菌的区别
（1）消毒（如巴氏消毒法62℃，30min、酒精 擦拭等）仅杀死活的微生物，不能杀死芽孢。
（2）灭菌（高压灭菌1.05kg/cm2、121℃、1530min；灼烧灭菌、干热灭菌等）能杀死所有微 生物及其芽孢。
大肠杆菌菌落 菌落灰白色，圆形，透明或半透 明
枯草杆菌菌落 菌落灰白色，较 大，边缘比较粗 糙
滕黄八叠球菌菌落 菌落黄色，圆形、边缘 光滑
为什么在操作的第一步以及每次划线之前都 要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要 灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上 的微生物污染培养物 杀死残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种 直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次 数的增加，使每次划线时接种物逐渐稀释，培 养后得到单个菌落。 避免接种环上的细菌污染环境和感染操作者。
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算 2.称量 3.熔化 4.调节pH 5.分装 6.灭菌 7.恒温培养
二.大肠杆菌的培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡培养大肠杆菌： 1.接种： （超净工作台上、酒精灯火焰旁进行） 划线法 冷却后刮取菌苔 接种环
菌种
划线法接种： 使接种物逐渐 稀释，培养后 出现单个菌落 划线法接种
微生物重点实验1
——实验1.2 培养基的配制
• 学习目标：
– 掌握培养基的配制的过程 – 理解无菌操作
组内合作：
1、说出培养基配制流程；
2、讨论消毒与灭菌的区别，小结常用
NaCl H2O 琼脂 5.0g 10.0g 5.0g 1000mL 2.0g
2、称量
3、熔化
3、下列对于灭菌和消毒的理解，不正确的是（ B ） A.灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B.消毒和灭菌实质上是相同的 C.接种环用灼烧法灭菌 D.常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸气灭 菌等
4、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、
空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是（
①化学消毒 ④紫外线消毒 A.⑤⑤②①④⑥ ②灼烧灭菌 ⑤高压灭菌 ③干热灭菌 ⑥巴氏消毒法
A
）
B.①②③④⑤⑥
C.⑥②③④①⑤
D.③④②①⑥⑤
1、鉴别培养基是否被杂菌污染的方法是（ A.将未接种的培养基放在实验桌上培养 B.将未接种的培养基放在窗台上培养 C.将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养 D.将已接种的培养基放在恒温培养箱中培养
C
）
2、要将配制好的培养基进行灭菌，通常采用的方 法是（ B ） A.灼烧灭菌 B.高压蒸气灭菌 C.干热灭菌 D.煮沸灭菌