治疗癌症
• 基因重组乙肝疫苗
• 用基因重组技术把乙型肝炎病 毒的表面抗原 （）基因片段插入 酵母细胞或哺乳动物细胞的基因中， 在体外培养增殖过程中组装或分泌 出乙型肝炎表面抗原，然后把表面 抗原收集起来提纯之后做成乙型肝 炎疫苗。
乙肝疫苗的制备
目的基因的获取
编码乙型肝炎表面文抗库原的的基建因的获取 立？
目的基因的表达
蛋白质的分离纯化
• 浓缩与初步纯化 • 离子交换层析 • 疏水层析 • 亲和层析 • 固液分离 • 离心沉淀 • 膜过滤 • 双水相萃取 • 高度纯化 • 的去除 • 热原质的去除
• 分离纯化的基本要求 • 技术条件温和，保持其生物活性 • 选择性好，达到有效分离纯化的目的 • 技术间可以直接连接，节省工艺步骤 • 收率高，过程快
• ④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受 剪切力和渗透压能力 ,可以进行悬浮培
• 材料
• 菌株﹑质粒及细胞 • 大肠杆菌 5α 和质粒 18（携带改变
稀 有密码子后的 S 基因） • 质粒 • ／ 细胞 • 18 载体
• 主要试剂
• 限制性内切酶、T4 、质粒 提取 • 和柱式胶回收试剂盒 • 乙型肝炎表面抗原检测试剂盒 • 和透析胎牛血清 • 胰蛋白酶、氨甲喋呤（）和脂质体 • 血凝检测试剂盒
• 选择分离纯化方法的依据 • 根据产物表达形式来选择 • 根据分离单元之间的衔接来选择 • 根据分离纯化工艺的要求来选择
分离纯化工艺流程
• 1、发酵液的预处理
• 连续高速离心，除去细胞残片，再超滤 浓缩
• 2、疏水柱层析
• 介质： S • 加入适量硫酸铵，调节电导率与柱层析
平衡液电导率相等 • 按照平衡柱床、上样吸附、平衡液洗柱
• 5、除菌
• 收取到的除菌过滤，即为纯品
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2020/11/5
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基因工 程药物
植物细胞
动物细胞
人类细胞
转基因植物 培养的动 物细胞
卵细胞
胚胎 发育
基因 治疗
药物、疫苗 转基因动 物
• 蛋白质名称
用途
• 促肾上腺皮质激素（ ） 治疗风湿（ ）
• B细胞生长因子（ ）
治疗免疫系统功能失调
• 降钙素()
治疗软骨病()
• 集落刺激因子( )
治疗血液病、肿瘤辅助治疗
• 绒毛膜促性腺激素( )
、降低硫酸铵浓度解析、清柱再生程序
• 3、阴离子交换柱层析
• 介质： • 活性蛋白经 25柱脱盐换液，使缓冲盐
系统的、离子强度和平衡液一致 • 按照平衡柱床、丄样吸附、氯化钠浓
度梯度分段洗脱、清柱再生程序层析
• 4、凝胶过滤柱层析
• 介质： 4 • 超滤浓缩到适当体积 • 按照平衡柱床、丄样、洗脱程序层析
乙肝疫苗的制备
基因工程
定义：又称为重组技术，指将某些特定 的基因或片断，通过载体或其它手段送 入受体细胞，使它们在受体细胞中增殖 并表达的一种遗传学操作。是生产出符 合人类需要的产品或创造出生物的新性 状并能稳定遗传。
获得目的基因
表达载体
重组的表达载体
酶切、连接
转化、转染等
宿主细胞
原核生物细胞
转基因 微生物
一般的目的基因的获取方法有： 反转录法 化学合成胞的特点 • ①具有准确的转录后修饰功能 ,表达的
糖基化药 物蛋白在分子结构、理化特性 和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分 子
• ②具有产物胞外分泌功 能 ,便于下游产 物分离纯化;
• ③具有重组基因的高效 扩增和表达能力 ;
治疗不排卵症
• 内啡肽和脑啡肽( )
镇痛剂( )
• 上皮生长因子( )
促进伤口愈合
• 红细胞Ⅷ( Ⅷ)
治疗血友病()
• 凝血因子Ⅸ( Ⅸ)
治疗血友病
• 生长激素( )
促进生长
• 生长激素释放因子( ) 促进生长
• 胰岛素()
治疗糖尿病()
• 干扰素()
抗病毒抗肿瘤
• 白细胞介素()