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植物组织培养的培养基配制实验设计


化合物 CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O H3BO3 KI MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O
培养基 浓度 (mg/L)
0.025 0.025 6.2 0.83 22.3 8.6 0.25
微 II 量 元 素
1升母液 每升培 母液扩 中药品 养基取 大倍数 称取量 母液的 (mg) 量(ml) 25 25 6200 1000倍 830 1 22300 8600 250
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植物细胞工程学——郑传益制作
母液配制
母液配制准备 托盘天平、电子分析天平、烧杯、玻璃棒、容量瓶、 标签纸、记号笔、胶头滴管、蒸馏水、0.1mol/L NaOH[aq]、 0.1mol/L HCl[aq] 、 PH试纸
标签纸格式示例:
母液类型编号 浓度 配制人 详细日期
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母液配制
表4
1升母液 每升培 母液 培养基浓 母液扩 中药品 养基取 化合物 类别 度(mg/L) 大倍数 称取量 母液的 (mg) 量(ml) 甘氨酸 2 400 有 盐酸硫胺素 0.4 80 VI 机 盐酸吡哆素 0.5 200倍 100 5 物 烟酸 0.5 100 肌醇 100 20000
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母液配制
母液配制中注意: (1)NH4NO3、KNO3此两种药品为易爆品,取用 时一定要轻拿轻放,保存在阴凉处。 (2)EDTA-Na2、CoC12、2,4-D此三种药品为致 癌物,配制时要带胶皮手套,或两层塑料手套 。 (3) 定容原则:在母液配制时部分需要加热促 进溶解,定容一定要等到常温下进行。
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母液配制
微量元素母液II配制
各成分按照表2用适量蒸馏水分别溶解,按顺序逐步 混合。后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中,即为 1000倍的微量元素母液。倒入细口瓶,贴好标签保存 于冰箱中。
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母液配制
表2
母液 类别
植物组织培养的培养基配制
实验设计
姓名:郑传益 学号:1101410722 Q Q:1410928287
概要
MS培养基营养成分较多,而且一些成分用 量很小。为便于配制,可以分类扩倍制备浓缩母 液,使得配制MS时快捷方便、成分需求量更为准 确。
• 母液配制及注意事项 • 培养基配制及注意事项
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培养基配制
操作步骤 1.根据配方要求,用量筒或移液管从各母液中分别 取出所需用量,放入同一烧杯中并将称取好的蔗糖 和琼脂放在一边备用; 2.将称取好的琼脂加入盛有加热后的(沸腾后停止 加热)蒸馏水约300ml的搪瓷杯中溶解,并不断搅 拌,直至溶液呈透明状; 3.将1.烧杯中的试剂和蔗糖加入至溶解好的琼脂溶 液中,边加热边搅拌,定容至1000mL; 4.调节PH; 5.分装标记后封装灭菌。
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结语
参考资料来源于: 小木虫 /bbs/viewthread.php?tid=4172764 中国知网空间 (1)/Article/CJFDTOTAL-AHNY200804031.htm (2)/Article/CJFDTOTAL-ZWSL199701001.htm 溶解性表、溶解度表、各成分物质性质——维基百科 /wiki/Wikipedia:%E9%A6%96%E9%A1%B5 图片引用声明: 所有图片均援引自淘图网——生物科学,并做出相关ps处理 /search.php?keyword=%C9%FA%CE%EF%BF% C6%D1%A7
*如果需要添加相关激素,为方便实验 操作,同样可以扩倍配制激素母液使用
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培养基配制
培养基配制准备: 量筒、移液管、烧杯、蔗糖、琼脂、天平、电热炉、 玻璃棒、铁架台、锥形漏斗(带橡胶管)、搪瓷杯、 PH试纸、培养皿
注意事项: 1.培养基熔化后要趁热定容,否则培养基低温琼脂 将凝固,造成营养成分浓度不均。 2.对PH要求较严的目标培养物,调解pH时最好用 电子pH计,以保证精确度。pH试纸的误差较大,要 小心调节。可以将pH调到比最适值小约0.2,因为培 养基在灭菌后,pH将变大。
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母液配制
母液配置要求 1.按照《MS培养基成分表》中成分准备试剂。 2.母液划分分组依据: a.根据元素需求量划分并配制等倍浓缩液混匀便 于取用 b.母液中各物质不能因反应而产生沉淀。其中, Ca2+与SO42-混合会产生CaSO4沉淀;在钼酸盐中, 铵、碱金属、镁和铊盐溶于水,其他都不溶于水。 3.母液扩大倍数依据:由于所配制母液在未使用情 况下需要放置在4℃下保存,所以要求在该温度下不 能饱和析出,以免影响使用。各物质的溶解度详细 参考各物质的溶解度曲线。
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母液配制
大量元素母液I配制
各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取,各 种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混 合,混合时应注意先后顺序。后用蒸馏水定容到 1000ml 的容量瓶中,即为10倍的大量元素母液。倒入细口瓶,贴 好标签保存于冰箱中。 *母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解,药品采用等级较 高的分析纯。
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母液配制
有机物母液IV配制
培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用 蒸馏水溶解,定容至1000mL,注意称量时用电子分析天 平。 注意事项: 由于维生素母液营养丰富,因此贮藏时极易染菌。被菌类 污染的维生素母液,有效浓度降低,并且易给后期培养造 成伤害,不宜再用。避免此现象发生的方法是:配制母液时 用无菌重蒸馏水溶解维生素,并贮存在棕色无菌瓶中,或 缩短贮藏时间。
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母液配制
表1
母液 类别
大 量 I 元 素
培养基 1升母液中药 每升培养 母液扩 化合物 浓度 品称取量 基取母液 大倍数 (mg/L) (mg) 的量(ml) MgSO4.7H2O 370 3700 KNO3 1900 19000 KH2 PO4 170 10倍 1700 100 NH4.NO3 1650 16500 CaCl2.2H2O 440 4400 注意事项: 在溶解CaCl2· 2H2O 时,蒸馏水需加热沸腾,除去 水中的CO2,以防沉淀。另外,CaCl2· 2H2O放入 沸水中易暴沸,操作时要先等水温温和后加入
注意事项: 依照次序添加试剂,防止发生沉淀反应
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母液配制
Fe元素母液III配制
目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯 合物,必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便,又 比较稳定,不易发生沉淀。各成分按照表3分别用适量蒸 馏水将FeSO4和Na2-EDTA 加热溶解后混合,再一边加热一 边不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min),调pH值 至5 .5,室温放置冷却后,用蒸馏水定容到 1000ml的容量 瓶中,即为200倍的Fe元素母液。倒入棕色细口瓶,贴好 标签后再冷藏。
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母液配制
表3
பைடு நூலகம்
母液 类别
化合物
培养基浓 度(mg/L)
III铁 Na2.EDTA 盐 FeSO4.7H2O
37.3 27.8
1升母液 每升培 母液扩 中药品 养基取 大倍数 称取量 母液的 (mg) 量(ml) 7460 200倍 5 5560
注意事项: 在配制铁盐时,如果加热搅拌时间过短,会造成FeS04 和Na2-EDTA 鳌合不彻底,此时若将其冷藏,FeSO4会 结晶析出。
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