试验条的接种 用同一根吸管分别接种盐水菌悬液从 NO3 到 PNPG 试验管。 将吸管的顶部靠在小管内缘加液体，以避免形成气泡。 打开 AUX 培养基的安瓿管加入 200ul(6 到 8 滴)剩下的生理 盐水菌悬液至安瓿，仔细混匀，但要避免有气泡产生。 注满由GLU至PAC管，管的表面必使其成平的或稍凸，不能 呈凹或新月形，否则高或低於表面都将影响结果。 GLU, ADH和CIRE则用矿物油覆盖，直至凸出的新月形成。 盖上培养盒，於 30°培养 24 小时。
触，必须立即用水冲洗至少 10
分钟；如与皮肤接触，用肥皂
洗和水冲。
对氨基苯磺酸
0.4 g
乙酸
30 g
H2O
具腐蚀性
70 ml
R34: 引起灼伤
S2: 避免儿童接触
S23: 避免吸入蒸气
S26: 如与眼睛接触，即用水冲洗，并
治疗处理
N, N-二甲基-奈酶胺
0.6 g
乙酸
30 g
H2O
70 ml 具腐蚀性
－用手垂直握住安瓿瓶(白色瓶盖向上) －尽量将瓶盖压下 －用大拇指顶住瓶盖上斜面部份 －向外施加压力直至瓶盖内瓶尖断裂 *无滴头安瓿：小心移开瓶盖 *附滴头安瓿：垂直倒置安瓿瓶，挤压瓶盖将所 有试剂加入滴瓶
所有加样後产品应视之带有污染性，需小心处理。 所有病人标本和细菌培养均可能带有污染性，应根据国际标 准 处 理 (NCCLS M29-72: CDC Manual Biosafety in Microbiological & Biomedical Laboraties, 1993) 在完成检测、判读後，所有标本，污染物及试条必须高温高 压消毒，烧成灰或在丢弃前浸於消毒水内杀菌。 最後鉴定的结果需由合格微生物学家肯定，同时需考虑病 史、标本来源、菌落及显微镜下生长形态、其他测试结果， 例如药敏结果。
附加试剂的使用
在使用前，所有附加试剂需达到室温（20-30°C） 1. NIT 1, NIT 2 和 OX 附加试剂(附有滴头的安瓿) －根据"警告及留意"一栏所列方法打开一安瓿试剂。 －滴出一滴试剂後小心盖上安瓿。 －根据"试剂的储藏"一栏，储存试剂。
2. JAMES 附加试剂（不附有滴头的安瓿） －根据"警告及留意"一栏所列方法打开一安瓿 JAMES 附加试 剂溶液。 －使用干燥加样枪将全部溶瓶加入含有冻干成份的滴瓶中。 －将滴头插入滴瓶。 －小心关紧瓶盖。 －摇动滴瓶。 －等待 5-10 分钟直至所有有效成份溶解。 －使用试剂後，拧紧瓶盖，根据"试剂的储藏"一栏，储存试剂。
举例：
1154 575 绿脓假单胞 查照分析图形索引和 API LAB 软件，查照/输入编号後，可 得以下信息： －被鉴定出的种名； －鉴定百分数，T 索引是看该种的阳性反应%； －鉴定质量的评价；
废物处理
S7/8: 保存干燥密封的容器
S43: 若引起火, 使用粉末灭火器 '不
得使用水.
试验条的储存
所有试条需储藏於 2-8°C 直至有效期 (列於包装盒上)。
附加试剂的储存
附加试剂应储於黑暗 2-8°C 环境下（除 NIT 1 可储於 2-30°C 及 Zn 可储於 8-30°C）直至有效期。 当安瓿瓶打开後，所有试剂只有一个月有效期（或包装盒上的 有效期，以较短时间为准）。 请小心记录开启安瓿的时间。 OX 和 JAMES 试剂对光非常敏感：请用箔纸包裹，只在使用时 才从冰箱中取出，同时应避免长时间放至放室温中。
选取菌落 API 20 NE 只适用於鉴定不属肠杆菌的非苛养革兰氏阴性杆 菌。首先，在培养基上分辨出几个相同的菌落，取其中一个菌 落进行氧化酶检测： －在玻片上放上张滤纸片。 －在滤纸上滴一滴水。 －取一个菌落涂在滤纸上。 －加一滴 OX 试剂 －如於 1 至 2 分钟内呈现深紫色，则为阳性反应。 反应结果应记录於结果报告单上成为第 21 个测试。 注 1：有些非肠杆菌的革兰氏阴性杆菌亦为氧化酶阴性(例如， 嗜麦芽黄单胞菌(S. Maltophilia)、不动杆菌(Acinetobacter)…) 这些细菌也可以用 API NE 鉴定，但必须根据其它细菌学或临 床特性加以选择。 注 2：对营养成份有特殊要求或需要特别处理步骤的苛养菌(例 如：布鲁氏菌(Brucella)和弗朗西丝氏菌(Francisella)并不包括 在 API 20 NE 的资料库内，使用者需采用有效方法排除他们的 存在。
（NH4）2SO4
2g
琼脂
1.5 g
无机盐基础
82.8 mg
氨基酸
250 mg
维生素和营养物底物
35.9 mg
磷酸缓冲液 0.04 M
PH 7.1
加至 1000 ml
最终 pH : 7.0-7.2
J 2183 化合物 (保密) 0.5 g
HCl 1N
gsp 100 ml
S24/25: 避免接触皮肤和眼.如与眼接
使用说明：
准备标本 所有临床或其他来源标本并不适用於直接接种於 API 20 NE， 所有需要鉴定的细菌首先需经标准微生物操作技术於合适的培 养基(例如，胰酶大豆琼脂)上分离。 所有细菌培养及标本需视为带有传染性，只有合格检验师方能 操作无菌技术及遵守有关细菌操作注意事项(NCCLS M29-72, Protection of Laboratory Worers from Infections Diseases, Tranmitted by Blood, Body flumids, & Tissue - 2nd Edition; Tentative Guidelines 及 Biosefety in Microbiological & Biomedical Laboratories. HHS Publication No. CCDC) 93-8395, 3rd Edition (May 1993). 或本地规定。)
判读试条 在 30°C 培养 24 小时後，参考说明表判读其结果； 记录所有自发代谢作用结果(GLU, ADH, URE, ESC, GEL和 PNPG)於报告单上； 为防止来自空气的污染源污染同化反应，判读 NO3 和 TRP 时，用培养盒盖子遮盖同化反应部份。 NO3 试验： －各加一滴 NIT1 和 NIT2 至 NO3 管 －5 分钟後，红色表示阳性反应，记录於报告单。 －因氮气的产生有可能引至阴性反应：加 2-3mg Zn 试剂到
试剂
一个试剂盒(25 测试)包括： －25 条 API 20 NE 试验条 －25 个培养盒 －25 安瓿 AUX 培养基 －25 张报告单 －1 份 API 20NE 操作说明书
附加试剂(不包括在试剂盒内)：
－NaCl 0.85% 悬浮液， 2 ml (Ref. 20700) －附加试剂: JAMES (Ref. 70540)
R34: 引起灼伤
S2: 避免儿童接触
S23: 避免吸入蒸气
S26: 如与眼睛接触，即用水冲洗，并
治疗处理
OX 试剂 5 ml
Zn 试剂 10 g
四甲基-对苯二胺
1g
异戊醇
100 ml
危害
R10: 易燃.
R20 吸入伤害
S24/25: 避免接触皮肤和眼
锌粉
易燃
R15: 若接触水可产生依然气体
R17: 在空气中可自燃
NO3 管中。 －5 分钟後，保持无色表明阳性反应，记录於报告单。如颜
色改变为粉红色，表明硝酸盐(nitrates)仍存在，被锌(Zn)还原 至亚硝酸盐(Nitrite)，反应结果为阴性。 用於细菌鉴定的反应是硝酸盐还原。当上述二个反应(产生 NO2 或 N2)任何一个是阳性时硝酸盐还原反应则为阳性。 N2 的产生则可单独作为附加实验结果。
20050
API 20 NE
非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定系统
只供体外诊断用
API 20 NE 是鉴定不属肠杆菌科，革兰氏阴性非苛养杆菌(例如，假单胞菌属(Pseudomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)、黄杆菌 属(Flavobacterium)、莫拉菌属(Moraxella)、弧菌属(Vibrio)和气单胞菌属(Aeromonas)等。)的标准鉴定系统，包括 8 个标准化常规 测试和 12 个同化试验。对营养成份有特殊要求或需要特别处理步骤的苛养菌(例如：布鲁氏菌(brucella)和弗朗西丝氏菌(Francisella)) 并不包括於 API 20 NE 的资料库内，使用者需采用有效方法排除他们的存在。可鉴定菌谱名录，请参考鉴定表。
试验条的准备： 准备一个培养盒（盘和盖子），倒入约 5ml 水於盘的蜂窝小 凹中，造成一个湿室。 记菌株资料於盘的边沿部分。 从包装中取出试验条放到盘中。
接种物的制备： －根据"警告及留意"一栏所列方法打开一安瓿 NaCl 0.85% (2ml)或使用 2ml 无杂质、无菌盐水。 －以接种针从分离物的平板上挑取 1-4 分纯单个菌落至悬浮基 物中，仔细研匀以达到均一的细菌悬液，所需浓度为 0.5 麦氏 单位标准浊度。 注 1：0.5 麦氏单位的标准浊度必须准确达到。否则将影响 API 20 NE 的鉴定准确度。特别是在浊度太低的情况下，可能造成 错误阴性结果。在操作过程中，切勿接触反应管杯。同时在孵 育後将试条长时间置於空气中。
原理
API 20 NE 试验条是由 20 个含干燥底物或培养基的小管所组 成。常规测定用生理盐水的细菌悬浮液接种後，形成液相培养 基。在孵育期间，代谢作用令反应管自然或在加入试剂後产生 颜色变化。同化测试含有少量培养基，只有可利用相应底物的 细菌才能生长。根据说明表判读反应，参照分析图索引和 APILAB Plus 软件得到鉴定结果。
3. Zn 附加试剂 －打开小瓶 －取大约 2-3mg Zn 粉未,使用小刮铲将粉未加入反应小管. －使用试剂後，拧紧瓶盖，根据"试剂的储藏"一栏，储存试剂。