菌种的复壮措施：
①纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。 ②通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillus thuringiensis的复壮） ； ③淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较
差的已衰退个体）。
④采用有效的菌种保： ①存活，不丢失，不污染 ②防止优良性状丧失 ③随时为生产、科研提供优良菌种
④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干 燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活 时间长，是目前最好的保藏方法。
⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低 温冰箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。
国内外菌种保藏机构：
❖菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌种、
1.退化（degeneration） ：菌种在培养或保藏 过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有 优良生产性状的劣化、丢失等现象，称为菌种 的衰退。
常见的退化现象：
菌落和细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越少； 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降；
对生物处理废水用微生物来说：
藏
湿法 半固体琼脂柱
方 休眠态
液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液）
法
干法 藏在玻璃管内
吸附在合适的载体上
4、常用保藏方法：
①低温保藏法 方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。 ②石蜡油低温保藏法： 橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。
③干燥保藏法
将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保 藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌 保藏，保藏时间几至几十年。
• 灭菌：用超高温或其他理化因素将所有微生物营 养细胞和所有芽孢、孢子都杀死的方法。
• 消毒：用物理、化学因素杀死致病菌（有芽孢、 无芽孢）或是杀死所有微生物营养细胞或部分芽 孢的方法。
干热灭菌
烘箱内热空气灭菌
通常温度160-170℃ ， 时间1-2h，金属器械、
玻璃器皿等
灭
火焰灼烧
菌 湿热灭菌 通常情况下温度为121.℃，20min。耐热的培养基
退化原因：
1、保藏菌种的培养基与原废水成分不完全相同， 所以需定期用原废水培养菌种，恢复其降解能 力，并加以保存。
2、频繁的移种传代也易变异、退化，所以要选 择合适的移种传代时间。
2、 菌种的复壮（rejuvenation）：使退化的菌种
恢复原来优良性状。狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况 下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找 出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施；广义 的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行 纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提 高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种
2. 原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分生 孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生 长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环境 要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等）
3.菌种保藏的方法
菌
连续在培养基上（内）移种
种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种
保
固体斜面
第三节 其它不利环境因子对微生物 的影响
• 紫外辐射 • 电离辐射 • 超声波 • 重金属 • 极端Ph • 干燥 • 有机物 • 抗生素 • 极端温度
• 低温一般不会使细菌死亡，所以经常低温保存菌 种
• 高温会破坏菌体蛋白质、脂肪等，杀死微生物
• 因此，微生物实验室中常选用高温进行培养基器 皿的灭菌。
菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以 及便于研究、交换和使用的目的。
❖菌种保藏机构：
中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL）
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
主要措施
冰箱保藏法（斜面）
巴氏消毒法
低温维持法：只要在63℃下维持30min
具
体 方
高温瞬时法：只要在72℃下维持15s
法
超高温法：只要在135-150℃下维持2-6s
第四节 微生物与微生物的关系
• 种内关系 • 竞争、互助 • 种间关系 • 竞争、互生、共生、偏害、捕食、寄生
第五节 菌种的衰退、复壮及保藏
一、菌种的衰退与复壮的概念
低温
冰箱保藏法（半固体）
低温
石蜡油封藏法
低温、缺氧
沙土保藏法
干燥、无营养
冷冻干燥法
干燥、无氧、低 温、有保护剂
适宜菌种
各大类 细菌、酵母菌
各大类 产孢子微生物
各大类
保藏期 评 价
3~6月 简便 6~12月 简便 1~2年 简便 1~10年 简便
有效
5~15年 简便 以上 有效