5.6 分光光度法（UV）测定提取物中多酚含量的操作规程
5.6.1 试剂：
5.6.1.1 盐酸（AR）
5.6.1.2 磷酸（AR）
5.6.1.3 重蒸水（HPLC级）
5.6.1.4 钼酸钠（AR）
5.6.1.5 钨酸钠(AR)
5.6.1.6 硫酸锂（AR）
5.6.1.7 溴（AR）
5.6.1.8 乙醇（AR）
5.6.1.9 无水碳酸钠（AR）
5.6.2 对照品
表儿茶素（购自Sigma 公司）
标定含量的提取物对照样
5.6.3 仪器和用具
5.6.3.1 玻璃仪器：容量瓶（50ml）、移液管（1ml、10ml）、比色皿：1cm、量筒。

5.6.3.2 电子天平：1/10000（德国产赛多利斯）
5.6.3.3 紫外分光光度计（上海产53WB）
5.6.3.4超声波清洗器
5.6.4 操作步骤：
5.6.4.1 斐林C试剂的配置：在2L的磨口瓶回流装置内加入100g钨酸钠
（NaWO
4.2H
2
O），25g钼酸钠（NaMO
4
.2H
2
O），700ml重蒸水，再加入50ml磷酸及
100ml盐酸，充分混合后在电加热帽加热至微沸腾，保持温度回流10小时，再加入150g硫酸锂(LiSO
4
)，50ml重蒸水及数滴溴，然后打开口继续加热15分钟，以便驱除过量的溴，冷却至室温用重蒸水定容至1L，过滤放入棕色瓶中于冰箱保存。

使用前取一定体积再稀释1倍使用，没有稀释的斐林C试剂可长期贮藏在冰箱中，一般情况试剂呈金黄色，如果试剂呈绿色则弃去。

5.6.4.2 20%碳酸钠溶液的配置：精密称取20g无水碳酸钠置于100ml容量瓶中，加入重蒸水超声溶解，冷却至室温，用重蒸水定容至刻度，备用。

5.6.4.3. 测定：
5.6.4.3.1 精密称取提取物粉末15mg加入50ml容量瓶中，用50%的甲醇超声
15min使溶解，冷却至室温，50%甲醇定容至刻度，摇匀。

5.6.4.3.2 精密吸取上述溶液1ml至50ml容量瓶中，加入20～30ml重蒸水，再加入2.5ml稀释后的斐林C试剂，静置8min，后加入10ml20%的碳酸钠溶液，用重蒸水定容至刻度，静置2h。

5.6.4.3.3 在765nm处测定其吸光度值（用50%的甲醇做空白对照）。

5.6.5计算：
多酚（%）=（E×A+0.006）×2.5
×100% M
式中；A样：样品溶液吸光度值
M样：样品重量（mg）
E：表儿茶素吸光系数;8.34。