亚甲基四氢叶酸还原酶多态性检测标准操作规程
一、检验目的
为保证本实验室检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因型时DNA提取、PCR扩增及扩增产物杂交、显色、芯片扫描实验操作的标准化，确保检测结果的准确性、重复性，制定本规程。

二、适用范围
适用于血液样本基因组DNA的提取、PCR扩增、杂交显色及报告。

三、方法原理
采用基因芯片技术，测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。

当溶液中带有荧光标记的核酸序列与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列，据此可重组出靶核酸的序列. 亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是叶酸代谢途径中的关键酶，可介导同型半胱氨酸在人体内的清除，促进DNA甲基化反应，C677T多态性导致MTHFR酶活性下降，引发叶酸代谢障碍。

在孕早期干扰神经管闭合，导致唇、腭裂等多种出生缺陷疾病。

研究表明，C677T多态性引起的高同型半胱氨酸血症还可诱导内皮细胞激活促凝因子，使机体处于高凝状态，从而促进血栓形成。

四、性能指标
1. 最低检出限：20ng。

2. 准确度：以3种MTHFR基因型的DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别；以10份企业标化的阴性质控品进行平行两次检测，结果一致且均为阴性；以浓度为8ng/ul的基因组DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别。

2. 精密度：以3种MTHFR基因型的DNA样品分别对同一批试剂盒平行检测20次，每天4次，分为5天，检测结果一致。

五、标本收集
1. 标本类型：静脉血的全血标本作为检测标本(抗凝剂为EDTA，抗凝剂的质量应符合化
试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准)。

2. 标本保存室温保存不超过7天，2～8℃不超过1个月，-20℃不超过7周，反复冻融不超过5次，全血的运输必须遵守国家相关规定。

3. 标本拒收与1、2所述不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，
12-1。