➢评价方法：
1.在某一样品中加上已知量的检测物重复检测， 计算检测值与预期值的偏差
2.检测已知量的参考品，计算检测量与标化量 的偏差
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核酸诊断试剂的质控和评价
定量范围
➢定义：能够给出准确量值的范围
➢建立的方法：主要对系列稀释样品的反复检测
制定的
➢定量曲线：线性或非线性
➢要求：对定量范围的上限和下限样品进行检测
核酸诊断试剂的质控和评价
•Frequency
值的计算以及意义
•cut-off •delta = d / SD
•• d -
•X
d+
•X
•OD/CO data must be
transformed to log10 values before the analysis
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•0
•log10
时，其精确性仍能符合要求
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核酸诊断试剂的质控和评价
重复性（Reproducibility）
➢不同实验次数之间（Run-run） ➢不同实验室之间（Site-site） ➢不同实验人员之间（Operator-operator） ➢不同时间之间（Day-day） ➢特殊情况下的重复性
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核酸诊断试剂的质控和评价
临床研究的意义以及目的
➢临床前样品虽有代表性，但数量毕竟有
限并不能完全代表临床情况
➢通过临床试验对临床前制定的各项指标
进行修正
➢可以发现或预测在实际应用中遇到的问
题，在说明书中提醒用户注意
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核酸诊断试剂的质控和评价
临床研究的基本要求
➢伦理考虑
➢ 阴性预期值 (NPV)：若样品没有反应，则不含检测
物的可能性
➢ 阳性预期值 (PPV)：若样品有反应，则含检测物体
的可能性
➢ 重复性（Reproducibility） ➢ 准确性（Accuracy) ➢ 精确性 (Precision）
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核酸诊断试剂的质控和评价
灵敏度
➢定义：试剂的检测限度
•100
核酸诊断试剂的质控和评价
企业
金豪 万泰 GBI 耀华 科华 丽珠 华美 新创 普生 绿科 中山 理利 Murex 梅里埃
特异性与值关系的分析
假阳性
特异性（%）
值
3
99.70
-3.985
2
99.80
-3.688
5
99.49
-3.423
1
99.90
-3.364
0
100
-3.687
3
99.70
-2.741
➢方法：检测一定数量的阴性样品，计算均值和标准差
均值和标准差，临界值等于均值加上2个标准差
➢意义：在临界值以上的样品有95%为真阳性
➢
➢临界值的评估：检测一系列正常人群、非正常人群
和特殊人群对临界值进行核对
➢表示方法：以量值表示（如ng，单位，CFU/ml，
PFU/ml，拷贝数等）；以稀释度表示
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2
99.80
-4.337
7
99.29
-3.636
15
98.48
-2.261
1
99.90
-3.060
8
99.19
-2.778
22
97.77
-1.774
11
98.88
-3.551
4
99.59
-4.311
•样品库有985份样品。特异性与其“δ”值相关性系数为0.691,具有显著的
PPT文档演模统板 计学意义(P=0.004）
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核酸诊断试剂的质控和评价
临床样品的选择
➢人群: 根据试剂的适应症选择不同的人群 ➢样品: 应为自然人群，尚未用同类试剂进行筛
查过
➢选择不同地区: 代表被测物的不同流行率，代
表被测物的不同基因型或血清型
➢疾病的时期: ➢样品的数量:
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核酸诊断试剂的质控和评价
检测方法
➢盲法平行检测
析其一致性，通常以变异系数或相对标 准误来表示
➢样品的要求：最好应含有高、中、低三
类
➢每一类样品至少检测4次，实际上检测10
次或10次以上
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核酸诊断试剂的质控和评价
准确性（accuracy)
➢主要评价试剂的系统误差，反映样品的
检测值和真实值的一致性
➢表示方法：
偏差（%）=（检测值-真实值）X100/真实值
台面、设备以及通风设施上等造成污染
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核酸诊断试剂的质控和评价
污染的处理
➢酶的灭活（UNG） 主要用于灭活产物 ➢光化学处理 用可溶性psoralen的衍生物处理，
在用长紫外照射 即可灭活产物、也可减少样品的 污染
➢化学处理方法 用于表面的处理
✓ 10%次氯酸钠 ✓ 紫外照射
➢物理的: 专用移液器、一次性试管架、紫外灯、 PCR工作罩、滤芯吸嘴。
核酸诊断试剂的质控和评价
影响灵敏度的因素
➢特殊疾病
有一些特殊的病人，其代谢异常可能影响标志物 的检测
➢干扰物质或抑制物质
可以来自与病人（药物）；也可来自于样品的处 理过程（反复冻融，溶血等）；或样品本身存在抑制 物等
➢样品基因型和血清型的影响
有些被测物存在多种基因型或血清型，若原材料 没有广谱性，则可影响灵敏度
2020/11/19
核酸诊断试剂的质控和评价
与辅助因子特异结合的物质均抑制反应
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核酸诊断试剂的质控和评价
核酸扩增常见的抑制物
➢血红素及其代谢物影响DNA聚合酶的反应，不
同来源的DNA聚合酶受影响程度不同
➢痰中的酸性多聚糖或糖蛋白均影响DNA聚合酶
的反应
➢脑脊液和尿中可能含有抑制物，但具体物质不
明确
➢粪便中的胆汁盐是PCR反应的强抑制剂 ➢肝素可与DNA聚合酶结合，对不同的酶抑制程
✓ 一般样品 ✓ 特殊样品
➢对研究对象保密 ➢临床前研究结果
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核酸诊断试剂的质控和评价
对临床研究单位以及人员的要求
➢从事相应的工作 ➢具有相应的技术人员 ➢有相应的仪器设备
如果试剂对仪器无特殊要求，则应选择不同 品牌或不同型号
➢有不同专业人员参加 ➢至少两家省级单位
➢对实施实验单位的能力进行评价
核酸诊断试剂的质Biblioteka 和评价数值的计算+ 检测结果
--
样品的实际状态
+
--
A
B
A+B
C
D
C+D
A+C B+D
•灵敏度= A/（A+C);特异性=D/（B+D）
•阳性预期值:1)简单的计算方法即：PPV=A/（A+B） 可以给出一个大约的数值;
•
2)精确的计算方法即：PPV= 流行率×敏感性/｛流行率×敏感性+（1-
流
•
行率）×（1-特异性)｝
•阴性预期值:1)．简单的计算方法即：NPV=D/（C+D） 可以给出一个大约的数值
• × PPT文档演模板
2)．精确的计算方法即：NPV=(1- 流行率）×特异性/｛（1-流行率）
核酸诊断试剂的质控和评价
精确性(Precision)
➢作用：评价试剂的随机误差 ➢通过重复检测某一或某些特定样品并分
核酸诊断试剂的质控和 评价
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2020/11/19
核酸诊断试剂的质控和评价
体外诊断试剂的种类
➢化学或生化检测试剂 ➢免疫学检测试剂
✓ 抗原检测 ✓ 抗体检测
➢核酸检测试剂
✓ 核酸杂交技术 ✓ 核酸扩增技术
➢其他试剂
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核酸诊断试剂的质控和评价
核酸扩增技术
➢目的片段的扩增
✓ 聚合酶链反应（PCR） ✓ 以转录为基础的扩增技术（TAS） ✓ 链取代的扩增技术（SDA）
指综合能力包括检测能力、仪器设备和人员 等,主要检测盲样，符合要求这方能参与
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核酸诊断试剂的质控和评价
对照方法或试剂的要求
➢新诊断试剂
✓ 疾病症状以及临床诊断 ✓ 相关试剂 ✓ 研究对象的追踪随访 ✓ 疾病的判断标准
➢已有同类产品的试剂
可选择同类试剂; 若评价试剂所用的原料为 基因工程产品，应用非基因工程 原料制备的 试剂进行评价；对结果不一致样品的处理
➢探针的扩增
✓ 连接扩增反应（LAR） ✓ 以FEN-1 DNA聚合酶为基础的扩增 ✓ 循环探针
➢信号扩增
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核酸诊断试剂的质控和评价
免疫检测的原理
➢直接法 ➢间接法
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核酸诊断试剂的质控和评价
免疫反应中按标记物分类
➢同位素标记的放射免疫法 ➢酶标记的酶联免疫法 ➢生物素标记 ➢化学发光物质标记的化学发光法 ➢荧光素标记 ➢时间分辨法 ➢其他标记物
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核酸诊断试剂的质控和评价
造成非特异性的因素
➢原料：主要纯度不够，原料本身存在非特异反应
物质
➢反应模式：如孵育时间缩短非特异反应可提高
3-4倍，非常短时可高达10倍
➢样品中的干扰物质：
✓ 病人本身：如自身免疫性疾病（高免疫球蛋白血症 等），黄疸类、溶血类和高脂类病人
✓ 病人使用特殊药物
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核酸诊断试剂的质控和评价
样品典型的正态分布
•Cut-off
•Frequency of observations