附件1河北省初筛实验室H I V抗体检测标本登记表
附件2河北省初筛中心实验室HIV抗体检测接收标本登记表
附件3HIV抗体检测试验记录
编号
1.样品、试剂、酶标板条室温平衡分钟。
2.取条板条，放在板架上，撕去板条上的封条。
3.在所有板孔中加入100μL的样品稀释液，包括要做质控的板孔。
4.在确定的板孔中加入50μL的标本或质控。
设3个阴性对照和1个HIV1阳性对
照、1个HIV2阳性对照。
在加入标本之后加入质控，并填写加样顺序表(见下表)。
5.在微板上盖上贴膜，洗板前撕去贴膜，37℃孵育60分钟。
6.在进行孵育的过程中，准备以下试剂：
（1）洗液（1:25）：浓磷酸盐缓冲液ml，加蒸馏水ml。
（2）TMB底物液（1:1）：TMBml，尿过氧化物ml。
（临用前配制）
（3）1M硫酸：取浓硫酸（98%浓硫酸相当于18M），加蒸馏水ml。
7.磷酸盐缓冲液浸泡板孔60秒，洗板机洗板，洗6次。
8.每孔加入100μL TMB底物液，不要混匀或振荡，弃去多余的TMB底物液。
9.室温℃环境中孵育30分钟，闭光显色。
10.每孔加入100μL1M硫酸，终止反应。
11.在450nm和620nm双波长读取每孔的吸光度，并打印结果。
A
B
C
D
E
F
G
H
呈阳性反应，需复检；其余均为阴性反应。
河北省性病艾滋病预防监测中心
1．样品、试剂、酶标板条室温平衡30分钟。
2．将酶联反应板从密封袋中取出，取下条板条，放在板架上。
按顺序编号，设一个空白对照孔，两个阳性对照孔，两个阴性对照孔。
3．每孔加入50μl样品稀释液，取阳性对照和阴性对照分别充分混匀后各50μl 加入对照孔中，空白对照孔只加样品稀释液，其余每个孔加待检血清50μl，（要先加样品，后加对照）轻轻振荡，充分混匀。
并填写加样顺序表(见表)。
4．用不干胶封片封盖反应板，置37℃温育30分钟。
5．温育期间配制洗涤液：取20×洗涤液ml，加蒸馏水ml。
6．撕去贴膜，用洗涤液洗5次，然后在吸水纸上拍干。
7．除空白孔外每孔加酶标抗原100μl，用不干胶片封盖反应板。
37℃温育30分钟。
8.洗板5次(同步骤6)，拍干。
9．每孔加显色剂A50μl，显色剂B50μl，轻轻振荡后置37℃暗处显色10分钟，每孔加终止剂50μl。
10．选择酶标仪450nm和620nm双波长测定，用空白孔调零点，测定各孔的吸光度。
并打印结果。
A
B
C
D
E
F
G
H
呈阳性反应，需复检；其余均为阴性反应。
河北省性病艾滋病预防监测中心
实验步骤：
1．将试剂盒、样本室温平衡30分钟；
2．取条板条，固定于支架，按顺序编号，设2个空白对照，3个阴性对照和2个HIV阳性对照。
空白对照孔不加样品和酶结合物，只加底物和终止液。
在确定的板孔中加入100μL的标本或质控（要先加样品，后加对照）。
并填写加样顺序表(见表)；
3．覆盖粘胶纸，置37℃孵育60分钟；
4．按1：25的比例稀释洗涤液，取ml洗涤液，加入ml蒸馏水；
5．取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸干板内液体；
6．将洗涤液注满每孔(约300μl／孔)，吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干；
7．每孔加酶结合物1OOμl，取新粘胶纸覆盖反应板，置37℃孵育30分钟；
8．洗涤同步骤5、6；
9．每孔加入底物缓冲液50μl、TMB50μl，混匀，置37℃显色lO分钟；
10．加终止液50μl振荡反应板5秒钟，使之充分混匀；
11．在酶标读数仪中，取波长450nm(建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm),以空白对照孔校零，读取每孔吸收值(加终止液后，务必在15分钟内读数完毕)。
A
B
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D
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G
H
呈阳性反应，需复检；其余均为阴性反应。
附件4
12.样品、试剂、酶标板条室温平衡15-30分钟。
13.取条板条，放在板架上，撕去板条上的封条。
14.在每孔中加入100μl酶标试剂，空白孔除外。
15.在确定的板孔中加入20μl的标本或阴阳性对照，震荡混匀。
设1个空白对照，
3个阴性对照和2个HIV阳性对照，并填写加样顺序表(见下表)。
16.在微板上盖上贴膜（洗板前撕去贴膜），37℃孵育60分钟。
17.配制洗涤液，取10Ⅹ浓缩洗涤液ml，加去离子水ml（1:10稀释）备用。
18.磷酸盐缓冲液浸泡板孔60秒，洗板机洗板，每孔6次（程序已编号）。
19.每孔加入显色剂A、B各50μl，轻轻振荡混匀。
20.封板膜封板后37℃闭光显色30分钟。
21.每孔加入100μl终止液，轻轻振荡混匀，终止反应。
22.在450nm和620nm双波长读取每孔的吸光度，并打印结果。
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F
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H
呈阳性反应，需复检；其余均为阴性反应。
附件5
次数
图：VironostikaHIVUni-FormIIplusO质控图。