观察指标①光镜下的骨组织形态结构;②骨密度( BM D) ;③骨钙和骨磷含量。

观察指标的时间和方法:各实验组在第10周和第20周随机取5只大鼠用lOg/L 戊巴比妥钠溶液腹腔麻醉( 3. 0 mg/kg)后再处死。

取左侧股骨经固定、脱钙、脱水、石蜡包理，再切片HE染色200倍光镜观察骨组织形态结构;取右侧股骨分离软组织后烘干用XR一600双能X光骨密度测量仪测量骨密度，扫描宽度为1. 5 cm，长度为4. 3 cm，扫描速度为4. 0 s / m。

测量骨密度后的右侧股骨再置于105℃烤48 h至恒重，称重后再把干骨移人柑祸内，加热炭化至无烟，降温至600℃恒温60 min，加20%的盐酸溶解，用去离子水至容量刻度，用W FX一IE2型原子吸收分光光度计测定骨钙含量。

骨磷测量采用测定骨钙同样方法烘干至恒重称重后再加人20%的盐酸，置于110℃烤箱中24 h使之完全溶解，最后开瓶加去离子水至容量刻度，应用南京建成生物工程公司生产的磷试剂盒，722型可见分光光度计测定骨磷的含量，按说明书操作。

观察指标(1)体重和饲料摄入量：每周称量1次体重，记录2次食物摄入量。

(2)股骨重量测定：实验结束动物处死后剥离右侧股骨。

于105"{2烤箱中烤至恒重．称量骨干重。

(3)股骨骨密度测定：用双能x光骨密度仪测最左侧股骨中点及远心端的骨密度。

(4)骨钙含量测定：实验结束后处死动物剥离钉侧股骨，于105℃烤箱中烤至恒重，称世骨干霞，移入坩埚内，置电炉上炭化至无烟为止。

移入马弗炉，升温至500℃，恒温30 rain，再升温至700℃。

恒温60 min。

样品灰化后，加入20％的盐酸完全溶解，移入50 m1容量瓶中，用去离子水定容至刻度采用原子吸收法测定。

仪器为SPECTRAA220Z原子吸收光谱仪(澳大利亚V ARIAN公司)。

(5)生化指标：谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、白蛋白／球蛋白、总胆固醇、甘油三酯、肌酐和尿素氮。

上述指标均用日立7600全自动生化仪检测。

参数测量采用德国OPTON公司生产的AIRS型训-算机半自动图象分析系统，每只鼠观察荧光切片和甲苯胺蓝染色切片各2张。

测量参数如下:
相对骨小梁体积=骨小梁面积/总面积X100%
平均骨小梁厚度=200 X骨小梁面积//1. 199X骨小梁周长。

平均骨小梁间隔=200x(总面积一骨小梁面积)/1. 199X骨小梁周长。

矿化沉积率=荧光双标记间距/双标记间隔时间。

1 . 静态参数: 用来评价药物防治效果，描述骨量的多少和骨小梁的形态结构。

，骨小梁面积百分数 ( % T b . A r ) : 指骨小梁面积占骨组织面积的百分率，反映骨量的多少，由宽度和数量二者共同决定。

. 骨小梁宽度 ( T h . T h ) : 用于描述骨小梁结构形态，解释骨量变化。

其变化可影响骨量，在数量一定的条件下，宽度越宽，骨量越多.
. 骨小梁数量 ( T b . N ) : 用于描述骨小梁结构形态，解释骨量变化。

其变化可影响骨量，在宽度一定的条件下，数量越多，骨量越多。

，骨小梁分离度 ( T h . S p ) : 指骨小梁之间的平均距离，用来描述骨小梁结构形态。

分离度越大，骨小梁之间的距离就越大，骨就越疏松。

2 . 动态参数: 动态参数包括骨吸收参数和骨形成参数，通过动态参数，可以了解骨表面矿化的量和速率，并解释静态参数变化的原因。

骨形成参数:
荧光周长百分率 ( % L . P m ) : 反映进行矿化的骨周长占骨表面总周长的百分率，也反映成骨细胞的数量.
矿化沉积率 ( M A R ) : 指每天矿化的速度。

反映骨矿化的快慢，代表成骨细胞的活性。

骨形成率 ( B F R / T V ) : 每年新形成的骨小梁面积占骨组织面积的百分比，代表每年骨小梁表面新形成的骨的总量. 它受两个因素影响，一是骨量的多少，骨量越多就提供更多的新骨形成所需的骨小梁表面 ; 二是骨形成活跃程度，骨形成越活跃，在单位长度上形成的新骨就越多。

骨吸收参数:
破骨细胞数 f 量( N . O c ) : 单位骨小梁面积上的破骨细胞数，反映骨表面破骨细胞出现的数量多少，反映与破骨细胞有关的骨吸收情况.
，测量左侧股骨远端与胫骨近端骨骺和干骺端松质骨的 3 个参数： T ． A r ( 总组织面积 ) ， T b ． Ar ( 骨小梁面积 ) ， Tb ． P
m( 骨小梁周长 )。

骨组织形态计量学参数
上述测量仅测出了特征物的二维长度和面积（点计数除外），根据体视学原理，尚需转换为三维参数。

这样，二维的长度与面积应理解为三维的面积与体积。

现在有专门的骨科软件可供使用，若无，则需代入相应公式计算。

骨组织形态计量学参数共60多个，具体可分为静态参数和动态参数，常用于研究骨折愈合的参数〔5~7〕有：
2.4.1 静态参数
①类骨质均宽（Osteoid width，O.Wi）：将类骨质测n次宽度后，取平均值。

公式：O.Wi=类骨质宽度之和/n （μm）
②类骨质表面（Osteoid surface，OS）：指类骨质表面长度占骨小梁表面长度的比例。

公式：OS=类骨质表面长度/骨小梁表面长度（%）
③类骨质体积（Osteoid volume，OV）：类骨质面积占骨组织面积的比例。

也叫类骨质体积密度、体积分数、面积分数。

公式：OV=类骨质面积/骨组织面积（%）
④成骨细胞指数：指每1 mm骨小梁表面长度平均成骨细胞个数（个/mm）。

⑤矿化骨痂均宽（Mineralization width，MLW）：将矿化骨痂测n次宽度后，取平均值（μm）。

⑥矿化骨痂体积（Mineralization volume ，MLV）：为矿化骨痂面积占骨组织面积的比例。

其含义及公式同类骨质体积（%）。

⑦破骨细胞吸收表面（Osteoclastic resorption surfaces，ORS）：指Houseship陷窝的表面长度与骨小梁表面长度的比值（%）。

⑧破骨细胞指数：指每1 mm骨小梁表面长度平均破骨细胞个数（个/mm）。

上述①②③④为骨的形成参数，⑤⑥为骨的结构参数，⑦⑧为骨的吸收参数。

2.4.2 动态参数
①矿化率（Mineralizition rate，MAR）：指每日在活性成骨表面新沉积的矿化骨厚度。

MAR=双标记带平均宽度/双标记间隔天数（μm/d）
②纠正矿化率（Adjusted Mineralization rate，jMAR）：
jMAR=MAR×双标长度/类骨质表面长度（μm/d）
③矿化延迟时间（Mineralization lagtime）：类骨质宽度除以纠正矿化率即为矿化延迟时间。

④骨形成率（Bone formation rate，BFR）：
BFR=矿化率×单标长度×（骨小梁表面长度/骨小梁面积）×100（μm2/μm・d）。

⑤骨吸收率（Bone erosion rate，BER）：
BER=吸收陷窝深度/吸收陷窝表面长度×（平均骨壁厚度/MAR）（μm2/μm・d）
平均骨壁厚度是粘和线到骨小梁表面的距离，甲苯胺蓝染色不易观察，需用特定的染色方法。

⑥其他尚有骨重建周期、双标记表面和单标记表面等参数。