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一、薄层色谱法的主要类型和原理
吸附薄层色谱法
原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、 再吸附、再解吸附的过程。
吸附系数不等实现分离。 一般极性强的组分K大，Rf值小；极性弱 的组分 K小，Rf值大。
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薄层色谱法的主要类型和原理
分配薄层色谱法
– 原理：多次分配的过程，分配系数 （溶解度）不等实现分离
与组分及色谱条件有关
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定性参数2
相对比移值(relative Rf；Rr)
Rr = Rf (i)/Rf (s)=L(i)/L(s) 与组分、色谱条件、参考物质有关。
Rr值可以大于1，也可以小于1。 重现性和可比性均比Rf值好，能消除系统
误差（参考物质与组分在完全相同的条 件下展开）
纸色谱法:分配 薄层电泳法
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平面色谱法参数
定性参数 相平衡参数 面效参数 分离参数
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定性参数1
比移值(Rf值)
溶质移动距离与流动相移动距离 之比。（速度之比？）
Rf =L/L0 （定时展开） L为原点（origin）至斑点中心的
距离，L0为原点至溶剂前沿 （solvent front）的距离
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二、纸色谱法的实验条件
色谱纸的选择
对Rf值相差很小的化合物，宜采用慢速滤纸 对Rf值相差较大的化合物，则可用快速滤纸
固定相
水或甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇或缓冲 溶液。（酸、碱）
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纸色谱法的实验条件
展开剂的选择 增加展开剂中极性溶剂的
比例量，可以增大Rf值；增加展开剂中非极 性溶剂的比例量，可以减少Rf值。
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第二节 薄层色谱法 (thin layer chromatography；
TLC)
固定相（吸附剂或载体）涂布成一均 匀薄层，点样，（密闭的容器中）展 开，斑点显色，（与对照物质）比较 进行定性定量。
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特点：
快，需十至几十分钟，同时展开多个 试样。
试样预处理简单，对试样限制少。 载样量比较大，适用于制备。 仪器简单，操作方便。 分离能力较强。 灵敏度较高。
中性氧化铝(pH7.5)——分离酸性及对碱不稳 定的化合物；
酸性氧化铝(pH4.0)——酸性化合物的分离。 活度也与含水量有关。
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展开剂(流动相)
同吸附柱色谱
极性强的溶剂洗脱能力强
常用溶剂的极性强弱顺序：
水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正 丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿 ＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞ 四氯化碳>环己烷>石油醚。
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三、薄层色谱操作方法
制板 点样 展开 显色
均匀 集中 (多种方式) 预饱和
自学，实验课讲
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四、定性和定量分析
定性分析
比较Rf值或Rr值 、斑点颜色或荧光
常采用已知标准物质对照（同一板上展开）
多种展开系统的Rf值与对照品一致。 定量分析
洗脱法 直接定量法
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展开剂
选择原则：根据被分 离物质的极性
Stahl简图：极性物 质—活度低（活性 级大）的吸附剂-极性展开剂
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展开剂
混合溶剂
先用单一溶剂展开，
若Rf值太小，则加入一定量极性强的溶剂，如
乙醇、丙酮等，
如果Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如
环己烷、石油醚等)，以降低极性。 可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。
1.目视比较法（如杂质限度检查方法） 2.薄层扫描法
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第三节 纸色谱法
一、纸色谱法的分离原理
纸纤维为载体，吸着在其上的水为固定相 属于正相分配色谱 依据分配系数的不同而达到分离 极性或亲水性强的组分，K大，Rf值小，
极性弱或亲脂性强的组分，K小，Rf值大。 极性强弱？例：三个六碳糖
第十八章 平面色谱法 (plane chromatography)
分析化学教研室 李发美教授
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在平面上进行分离的一种色谱方法， 主要包括薄层色谱法和纸色谱法。
纸色谱法 薄层色谱法
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第一节 平面色谱法的分类和原理
分类 薄层色谱法：
吸附薄层色谱法 分配薄层色谱法 分子排阻薄层色谱法
吸附剂
硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基， 呈弱酸性。
原理：硅醇基(吸附中心)与极性基 团形成氢键（吸附性）。
组分与硅醇基形成氢键（被吸附） 的能力不同而分离。
应用：酸性和中性物质的分离，如 有机酸酚类、醛类等
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硅胶
活度与含水量的关系：含水量高，活性级高， 活度低。
活化：加热至100℃左右，除去吸附水提高 活度。（注意温度不可过高）
常用的展开剂 水饱和的有机溶剂，如水
饱和的正丁醇、正戊醇、酚等
操作步骤 点样、展开、显色、定性定量
分析
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主要内容：
比移值及其与K和k的关系、相对比 移值
吸附薄层色谱法：原理，吸附剂、 展开剂及其选择
薄层色谱定性方法 纸色谱法：原理和实验条件
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分离效率：与其粒度、孔径及表面积等有关。
常用硅胶：
–硅胶H，不含黏合剂 –硅胶G，含煅石膏 –硅胶GF254，含煅石膏和一种无机荧光剂，即锰激
活的硅酸锌，在254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧 光背景。
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15Leabharlann 吸附剂氧化铝碱性氧化铝(pH9.0)——分离中性或碱性化合 物，如生物碱、脂溶性维生素等；
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相平衡参数
分配系数K= Cs/Cm 容量因子 k= CsVs/CmVm K、k与Rf值的关系：
Rf 1
1
1 k
1 KV /V
s
m
k 1 Rf Rf
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相平衡参数
K、k与Rf值关系推导： (与定距展开比较) 1 Rf =L/L0=u/u0=R’= 1 k R’为保留比
– 分类：正相色谱、反相色谱
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薄层色谱法的主要类型和原理
分配薄层色谱法
正相色谱：水为固定相（硅胶载体），有机 溶剂为流动相。 极性强的组分K大， Rf值小。
反相色谱：烷基化学键合相为固定相，水－ 有机溶剂为流动相。 极性强的组分K小， Rf值大。
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二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂