糖分测定
试剂
MeJA购自日本Wako Pure Chemical公司。

组织培养过程中采用去离子水。

乙腈为色谱纯，流动相的水为Millipore pure级。

葡萄糖、果糖、蔗糖（分析纯100度烘干）购自Sigma公司。

设备
Waters 600E高效液相色谱仪，Alltech 2000 ELSD (Evaporative Light Scattering Detector，蒸发光散射检测器)，Waters μBondapak TM NH2色谱柱(3.9×300 mm)。

数据采用Waters公司的Enpower软件进行分析。

样品用Waters Sep-Park-C18固相萃取小柱过滤。

HPLC样品制备
样品提取方法按照Gerrits (2001)[184]和Laurel (2001)[185]的方法进行修改。

培养液样品的处理方法
1) 取-20ºC低温保存的培养液，室温下解冻，涡旋；
2) 取培养液0.5 ml，用去离子水稀释5倍；
3) C18柱过滤。

茎尖样品的处理方法
1) 0.5g 左右的样品，液氮研磨后加入3ml 80%乙醇，100ºC提取3min；
2) 12,000g，4ºC，离心10min；
3) 保留上清，在沉淀中加入1ml 80%乙醇，涡旋，70ºC提取5min；
4) 12,000g，4ºC，离心5min；
5) 保留上清，在沉淀中加入1ml 80%乙醇，涡旋，70ºC提取5min；
6) 12,000g，4ºC，离心5min；
7) 保留上清，在沉淀中加入1ml 去离子水，涡旋，70ºC提取5min；
8) 12,000g，4ºC，离心5min；
9) 保留上清，在沉淀中加入1ml 去离子水，涡旋，70ºC提取5min；
10) 12,000g，4ºC，离心5min；
11) 合并以上5步离心得到的上清，旋转蒸发后用水定容至25ml；
12) 取10 ml，冻干（找庄天明，再找杜红梅）（短期-20度，长期-80度）；
13) 在冻干后的样品中加入1ml 去离子水，涡旋；
14) C18柱过滤（一个柱3-5次，用甲醇洗一次，再用水洗一次，5ml
枪）。

色谱条件
液动相为乙腈：水(v/v) = 75：25。

上样前将C18柱过滤后的样品经0.45 µm 滤膜过滤。

上样量为15 µl，每个样品重复上样2次。

柱温25ºC，流速1 ml/min。

工作曲线的制备
称取100ºC烘至恒重的蔗糖、葡萄糖和果糖各5mg，溶解在1ml水中，分别配制成5 mg/ml的糖标准溶液和2.5 mg/ml的蔗糖、葡萄糖和果糖的混合溶液。

过滤后每种寡糖溶液和糖混合溶液分别进样5、10、15、20、25µl，记录色谱图，以峰面积的对数和进样量的对数作图得到标准曲线。