【引用】常用pH缓冲溶液的配制和pH值2011-05-13 20:01:24| 分类：生物|字号订阅本文引用自DSC《常用pH缓冲溶液的配制和pH值》一、常用溶液的配制（文章来自：医药园() 整理：zfg）（一）溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。
工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2．药品称量要精确。
3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。
（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。
2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g （或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。
3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。
（三）0.15Mol/L PB液Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。
Na2HPO4·12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L。
NaH2PO4·H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L。
NaH2PO4·2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23.4g/L。
（四）0.2Mol/L PB缓冲液0.2Mol/L Na2HPO4·2 H2O溶液35.61g/LNa2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/LNaH2PO4·2 H2O溶液含31.21g/L欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。
欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85％的NaCl溶液即可。
（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15Mol/L PH 7.2）NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。
此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。
) 整理：zfg1．硼酸（Ｈ3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。
2．硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。
（七）巴比妥缓冲液1．pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠 47.6g蒸馏水 3 000ml1.17N HCl 55.0ml（1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水）⑴将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。
⑵加1.17 N HCl 55ml。
⑶用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4 265ml。
2．pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥 1.84g巴比妥钠10.30g加蒸馏水至 1 000.00ml3．pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥 1.66g巴比妥钠12.76g加蒸馏水 1 000.00ml（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）不同pH，0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。
0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1 000ml。
（十）0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液NaHCO3 3.70gNa2CO3 0.60g溶于600.00ml蒸馏水中即得。
不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。
最好小量配制。
（十一）甘油磷酸缓冲液1．配制pH8.0磷酸缓冲液0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml0.1N NaH2PO4 5.50ml混合即可2．9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。
用途：用于免疫荧光试验。
（十二）Hank’s液1．贮存液NaCl 80.00gKCl 4.00gNa2HPO4·12 H2O 1.52gKH2PO4 0.60g葡萄糖 4.00g0.4％酚红液50.00ml双馏水加至100.00ml115℃高压灭菌15min，冰冻保存。
2．工作液贮存液1份双馏水9份115℃高压灭菌15min。
临用时用灭菌的5.6％NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。
（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’s reagent）配方1：氯化汞 6.0g碘化钾12.4g20％NaOH 30ml加蒸馏水至100ml配方2：碘化汞11.5g碘化钾8g蒸馏水50ml（完全溶解后）过滤，加20％NaOH 50ml。
用途：检测溶液中氨离子。
（十四）阿氏（Alsever’s）液葡萄糖 2.05g柠檬酸钠0.80g氯化钠0.42g蒸馏水 100ml溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。
（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）青霉素（40万U）5支链霉素（200万μg）1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。
临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。
（十六）洗液（清洁液）配方1：重铬酸钾150g蒸馏水300ml浓硫酸 3 000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。
此为强洗液。
盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。
洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。
如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。
配方2：浓硫酸50%蒸馏水50%重铬酸钾5%此为中等强度洗液。
配方3：重铬酸钾100g蒸馏水 1 000ml加热溶解，冷却后缓慢加入工业硫酸100ml此液为弱洗液，为棕红色。
使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。
1．0.2mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB）试剂：NaH2PO4?2H2ONa2HPO4?12H2O配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。
（1） 0.2mol/L的Na2HPO4；称取Na2HPO4?12H2O 31.2g(或NaH2PO4?H2O 27.6g)加二次水至1000ml溶解。
（2） 0.2mol/L的Na2HPO4：称取NaHPO4.?12H2O 71.632g（或Na2HPO4?7H2O 53.6g或Na2HPO4?2H2O 35.6g）加二次水至1000ml溶解。
（3） 0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO4?12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。
若pH 偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。
2．0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水（Phosphate Buffered Saline, PBS）试剂：0.2mol/L PB50mlNaCl 8.5～9g(约0.15mol/L)二次水至1000ml配制方法：称取NaCl 8.5～9g及0.2mol/L的PB 50ml，加入1000ml的容量瓶中，最后加二次水至1000ml，充分摇匀即可。
若拟配制0.02mol/L的PBS，则PB量加倍即可，依此类推。
PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等，其pH应在7.25～7.35之间，否则需要调整。
0.1mol/L的PB 常用于配制固定液、蔗糖等。
一般情况下，0.2mol/L PB的pH值稍高些，稀释成0.01mol/L 的PBS时，常可达到要求的pH值，若需调整pH，通常也是调PB的pH。
3．Karasson –Schwlt’s磷酸盐缓冲液试剂：NaH2PO4?H2O 3.31gNa2HPO4?7H2O33.77g二次水至1000ml配制方法：同前该缓冲液主要用于配制Zamboni’s固定液。
4．0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液。
试剂：Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g1N HCl约420ml二次水至1000ml配制方法：先以少量二次水（300～500ml）溶解Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6，最后加二次水至1000ml。
此液为储备液，于4℃冰箱中保存。
免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L，用时取储备液稀释10倍即可。
该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液。
5．Tris缓冲生理盐水（Tris Buffered,Saline,TBS）试剂：0.5mol/L Tris-HCl缓冲液100mlNaCl 3.5～9g(0.15mol/L)二次水至1000ml配制：先以二次水少许溶解NaCl,再加Tris-HCl缓冲液，最后加二次水至1000ml，充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。