Peprotech重组细胞因子和蛋白-常见问题解答(FAQ)1．PeproTech细胞因子和蛋白产品的稳定性如何？答：除非在产品说明书中特别注明，PeproTech的所有产品均为冻干粉，它们在室温条件下非常稳定(至少1个月)。
尽管如此，我们还是建议您在收到我们的产品后保存于-20oC，以确保蛋白100%的活性。
对于大多数蛋白，重悬后在4oC仅能短期保存(约1周)。
如想长期保存，请先配制成稀释液(其中必须含有载体蛋白，如0.1% BSA，5%HSA，或10% FBS)，然后分装冻存于-20oC或-80oC。
一定要避免反复冻融，因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。
2．为什么有时在管中看不到细胞因子或蛋白的冻干粉？答：与市场上的许多蛋白产品不同，PeproTech的产品中均不含载体蛋白或其它添加物(如牛血清白蛋白(BSA)，人血清白蛋白(HSA)和蔗糖等，并且是以最低含盐量的溶液进行冻干的，因此冻干后常常不能形成白色网架结构，而是微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。
打开管盖前，我们建议您在小离心机中快速离心20-30秒，使附着在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。
我们的质控步骤保证每管中所含的蛋白量准确无误，虽然有时您无法看到蛋白粉末，但管中的蛋白含量仍是非常精确的。
3．ED50和units/mg之间有何关联？答： ED50为半数有效浓度，其定义是可诱导50%最大反应的细胞因子浓度，这种活性表示法仅适用于剂量反应曲线呈S形的细胞因子。
其实，可以将ED50的值接理解为1unit。
如某种细胞因子或蛋白的ED50为1ng/ml，那么1ng/ml即可看作是1unit。
那么我们也不难理解，1mg(1x106ng) 该细胞因子或蛋白中应含1x106/1= 106units. ED50(ng/ml)转化为units/mg的公式如下：4．如何确定细胞因子的种属交叉活性？答：1) 除少数例外，大多数人类细胞因子对小鼠细胞均有活性。
2) 许多小鼠细胞因子也可作用于人类细胞，但比活性可能低于对应的人类细胞因子。
3) IL-7等为数不多的人类细胞因子作用于小鼠细胞时比对应的小鼠细胞因子活性更强。
4) 干扰素，GM-CSF, IL-3和IL-4等细胞因子种属特异，对非同源细胞几乎没有活性。
5) 相反，成纤维细胞生长因子(FGFs)和神经营养素(neurotrophins)高度保守，在不同动物种属细胞上均具有很好的活性。
当然，仅凭以上规律无法判断许多其它细胞因子的交叉反应活性。
如您在这方面存在疑问，请与PeproTech中国代表处联系，电话：*************，Email：***********************，我们会给您准确的答复。
5．到底什么是无动物成分(Animal-Free)的重组蛋白？答：诚然，PeproTech生产的重组蛋白均是人或小鼠和大鼠的，又怎么说成是Animal-Free，即无动物成分的呢？真正的原因是：这里的Animal-Free是指在表达人、小鼠或大鼠的重组蛋白的过程中未使用任何动物来源的材料，而不是指被表达的重组蛋白是Animal-Free的。
我们知道，重组蛋白通常是用大肠杆菌表达的，而大肠杆菌的培养基中需要添加胰蛋白胨(Trypton)等动物来源的组分，这些组分不可避免的在随后表达出来的重组蛋白中掺入诸多不明的动物成分。
虽然最后纯化出来的重组蛋白的纯度可达98%或99%，但另外1%中很可能含有来自胰蛋白胨的其它动物成分，这些动物成分虽然含量极微，但可能在重组蛋白应用于人体或动物时，将其中所含动物病原体(如疯牛病病毒及其它未知病原体)传染给人和动物。
而且，这些动物成分中的异源蛋白也会引起人和动物的异体排斥或过敏反应。
因此，当重组蛋白在应用过程中可能接触到人体或动物体时(如细胞治疗和动物体内实验等)，请尽量选用Animal-Free的重组蛋白。
PeproTech的无动物成分重组蛋白是在独立的完全无动物成分的生产车间中生产出来的，同时生产过程中不会使用到胰蛋白胨等任何含动物成分的培养基或试剂，因此可保证最终的重组蛋白中不含任何动物成分，非常适合于临床前试验和动物研究。
PeproTech的无动物成分产品的产品编号均以AF为前缀。
PeproTech现已有44种无动物成分的人、小鼠和大鼠重组蛋白，并在不断快速增加。
而且有些常用的细胞因子，如人EGF(表皮生长因子)已经完全采用无动物成分的生产方式，即不再提供含动物成分的人EGF。
PeproTech细胞因子和重组蛋白溶解必读（一）我们知道，PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉，这使得运输非常便捷，只要常温即可。
而且，细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定，在-20o C或-80o C条件下可保存数年。
冻干粉在使用前需进行溶解，然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。
溶解步骤非常关键，因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。
那么，应该如何进行正确的溶解呢？下面我们以Recombinant Human IL-4 (重组人IL-4，产品编号：200-04)的说明书为例，对细胞因子或蛋白的溶解方法进行详细的阐述。
拿到重组人IL-4的说明书后，您会发现有一段关于Reconstitution(重悬)的叙述，这段内容含有溶解相关的所有信息。
1. Centrifuge the vial prior to opening第1步：开盖前离心试剂管PeproTech的细胞因子或蛋白冻干粉装盛在塑料管中，为无菌包装。
冻干粉在运输过程中可能会因颠簸而漂散并粘贴于管壁或管盖上，所以在打开塑料瓶盖前，需将冻干粉通过离心收集到管底，以便用很小体积的液体即可将冻干粉完全溶解。
有很多用户会问一个问题，即应该用多少转速、多长时间离心试剂管，才能达到良好的收集效果？答：有些小型高速离心机(多为进口品牌)的面板上有一个Spin键，按了此键后，离心机会自动快速上升到其最大速度(10000rpm或12000rpm)，上升到最高点后速度即刻下降，直至停止旋转，整个过程大约30s。
这个Spin键足以很好的将细胞因子或蛋白收集到管底。
但有些实验室没有这样的高速离心机，只有最高转速为4000-4500rpm的离心机。
这种情况下，需3000-3500rpm离心5min，也能达到类似的效果。
2. Reconstitute in water to a concentration of 0.1-1.0 mg/ml. Do notvortex.第2步：用无菌水重悬至0.1-1.0 mg/ml，不可振荡。
这个步骤即为溶解步骤，非常重要。
1) 一定要用推荐的溶液重悬(或溶解)冻干粉用于溶解细胞因子或蛋白的溶液千差万别。
此例中的重组人IL-4需用水溶解，而重组人IL-2 (产品编号：200-02)则需用100mM Acetic Acid (醋酸)溶解，重组人TGF-beta1(产品编号：100-21)需用10mMCitric Acid (柠檬酸)，pH3.0溶解，重组人FGF-basic(产品编号：100-18B)需用5mMTris，pH7.6溶解，重组人FGF-10(产品编号：100-26)需用5mMSodium Phosphate(磷酸钠)，pH7.4溶解，重组IL-13(产品编号：200-13)需用20mMMHCl溶解。
(注：即使同一重组细胞因子或蛋白，不同批次的溶解方法也可能有所不同，因此上面的叙述仅供参考。
具体应该如何溶解应以相应批次的官方说明书为准)。
后续的文章中将对各种溶解液的配制方法进行详细的阐述，望继续关注。
经常有用户会问，为什么会有这么多种溶解方法？答：我们知道，蛋白的溶解性与很多因素有关，其中比较重要的是pH值和离子强度。
PeproTech的细胞因子或重组蛋白在出厂前均经严格测试，说明上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白完全溶解的液体。
如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符，很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能完全溶解或者根本无法溶解，这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。
有不少用户没注意说明书上的描述，而是根据习惯，直接用PBS或培养液(1640或DMEM等)等溶解细胞因子或蛋白的冻干粉。
这样做可以吗？答：有时可以，要看具体情况。
PeproTech的大多数细胞因子或蛋白冻干粉的溶解液不是PBS，此时千万不能用PBS或培养液直接来溶解，具体原因在上面已经叙述过。
而有部分细胞因子，如重组人KGF(产品编号：100-19)和重组人FGF-23(产品编号：100-52)等，说明书上的溶解液即为1x PBS，此时用PBS溶解完全没问题，那么用培养液溶解也是可以的，不过最好还是用先用PBS溶解，然后再用培养液稀释。
2) 一定要溶解到指定的浓度。
蛋白在一定的浓度范围内可以保持良好的稳定性，这个范围就是说明书上所标明的浓度范围，该例为0.1-1.0mg/ml。
这个浓度范围对于不同的细胞因子或重组蛋白是不同的。
如重组人FGF-6(产品编号：100-30)为0.5-1.0mg/ml，而重组人ActivinB(产品编号：120-15)则一定要是0.5mg/ml。
高于或低于该浓度范围会有什么问题呢？答：首先，细胞因子或蛋白会不稳定，即很容易出现活性下降的现象。
其次，高于这个浓度范围，可能会超过该蛋白的最大溶解浓度，即蛋白无法完全溶解。
再者，高于或低于该浓度范围，蛋白可能会出现聚集(aggregation)，最终结果还是部分蛋白未溶解，导致蛋白活性的减弱。
3) 一定不能振荡(vortex)。
这里所说的振荡是指用涡旋仪进行快速振荡。
有用户会问，若想保证溶解液与冻干粉充分混匀，以实现细胞因子或重组蛋白的完全溶解，该怎么办呢？答：多数细胞因子或重组蛋白的冻干粉是非常容易溶解的，一般我们用移液枪的枪头轻吹几下，即可使细胞因子或重组蛋白完全溶解。
对于不易溶解的细胞因子或蛋白，PeproTech会在说明书中进行备注(Note)。
如在重组人IL-13(产品编号：200-13)的说明书中您会看到：Slow todissolve (缓慢溶解)，在重组人IL-11(产品编号：200-11)的说明中会看到： Thissolution is slow to dissolve.(该溶液溶解缓慢)。
这种情况下，您最好能将要溶解的细胞因子或重组蛋白放在水平摇床(shaker)上低速摇一段时间，促使细胞因子或重组蛋白完全溶解。
有些蛋白，如重组人IL-13 Variant (产品编号：200-13A)虽然难溶，但却不需用摇床来加速溶解。
其说明书上的备注为：Allowthe reconstituted vial to sit at 4oC for at > 2 hours before use. (将重悬液在4oC静置2小时以上)3. This solution can be stored at 2-8o C for up to 1week.第3步：该重悬液在2-8o C最长可保存1周。