*****冻干粉针无菌灌装验证方案文件编号：执行前批准签字页部门起草人签字起草日期制造部质量保证部职责部门审核人签字审核日期制造部职责.部门批准人签字批准日期质量保证部职责1.目的本验证用胰蛋白胨大豆肉汤培养基溶液代替****冻干粉针的产品溶液，进行工艺模拟试验，检查和证明按照《注射用*****工艺规程》()所规定的生产工艺、设备及人员能够生产出符合《注射用****质量标准》()无菌试验项下要求的产品。

2.范围本次验证的范围适用于注射用*****生产的全过程，包括：人员更衣、各房间的清洁消毒、容器工具的处理、称量、调剂、除菌过滤、中控取样、动态下环境监测、无菌灌装、模拟冻干、轧盖过程，并在灌装过程中模拟的正常与非正常干扰活动。

3.责任者及职责3.1部门职责:工程部：保证所有动力系统的正常供应保证生产区域内的环境符合规定要求完成设备和设备上仪表的校验协助制造部完成验证程序制造部：起草、审核并批准验证方案和验证报告按照验证方案内容和生产操作规程进行操作完成验证记录质量保证部：审核并批准验证方案和报告监督验证实施过程质量控制部:样品无菌检查和培养基生长试验环境监测运营总监：审核并批准验证方案和验证报告3.2 验证小组成员：职责组长组织该验证工作，生产监督组员无菌灌装人员，负责按照方案实施无菌灌装过程及实施正常和非正常的干扰。

无菌灌装准备人员，负责无菌灌装物品的准备和灭菌冻干人员，负责操作冻干机维修人员，负责模拟设备维修状态QC检测人员，负责样品的无菌检查和培养基生长试验QC人员，负责环境监测QA人员，起草验证方案并负责工艺监督3.3 灌装过程中人员分工I项目人员安装灌装机组件注射用水灌装过程培养基灌装过程出箱轧盖4.验证简介本次验证考察按照工艺规程的要求进行的称量调剂、除菌过滤、湿热灭菌、西林瓶清洗灭菌、灌装和冻干过程是否可以满足无菌的要求，本次验证还考察人员的操作是否符合无菌要求,是否会对产品带来微生物方面的污染.在验证中还模拟了几种有可能发生的正常干扰和非正常故障，以考察在处理故障时，是否会对产品产生不良影响。

考察在灌装区人员最多的情况下对无菌过程的影响。

影响无菌灌装结果的主要因素包括：空气处理系统、水系统、洁净蒸汽系统、灭菌系统、清洗过程、人员等方面。

此次验证是按照《验证管理规程》进行模拟验证。

5.设备和物料5.1验证过程中使用的设备清单5.1.1生产用设备清单设备名称型号ID .设备编号校验有效期5.1.2中控检测用设备清单设备名称型号设备编号校验有效期5.2验证所用物料物料名称生产厂家/来源数量备注5.3验证所用的参考文件均为现行版。

6.验证工艺规程洁净级别图例房间 级别C 级 A 级培养基称量称量配制室 Compounding ※PH value pH 值测定※ 滤前培养基微生物检测模拟取样用注射用水调剂 西林瓶灌装半加塞灌装室 Filling※滤后培养基的无菌检查 ※每15分钟检查一次灌装量 ※正常干扰和非正常干扰 ※动态环境监测模拟冻干轧盖后样品收集※进行培养检查过滤室 Filtration串联两个0.22 m 滤器除菌过滤※ 灭菌前、滤后滤膜完整性检查 ※ 动态环境监测此次无菌灌装共进行1批，待培养的成品不少于5000支，按照工艺要求，无菌灌装从过滤结束到灌装完毕共进行12小时。

其中，前7个小时灌装注射用水，后5个小时灌装培养基6.1 无菌灌装验证操作过程6.1.操作人员按照《制剂工段物料进入管理规程》向仓库领用验证使用的物料后进入洁净生产区。

6.1.2验证小组按照所规定房间的洁净级别，对验证环境进行清洁和灭菌。

包括称量配制室、灌装室等所有房间。

具体操作方法见《制剂工段环境清洁消毒操作规程》6.1.3 验证小组进行验证用设备、容器、工具的清洗和灭菌。

具体操作方法见《制剂工段生产用器具清洗、包装操作规程》和《制剂工段生产用器具湿热灭菌操作规程》、《制剂工段生产用器具干热灭菌、干燥操作规程》。

6.1.4 胰蛋白胨大豆肉汤培养基由外清室进入制剂工段，按正常的清洁程序进入称量配制室，在天平上称取胰蛋白胨大豆肉汤培养基480.0g（其中300g为粉针无菌灌装使用，180g为水针无菌灌装使用），然后开始进行培养基的配制。

先量取10000ml注射用水加入调剂罐中，加入培养基粉末，将搅拌器速度调至500±10转/分，搅拌20分钟，再量取6000ml注射用水加入调剂罐中，将搅拌器速度调至500±10转/分，再搅拌10分钟。

取样20ml进行pH检测，配制后培养基pH值应在7.3±0.2之间。

然后模拟微生物污染水平检测的取样（50ml×2）。

按具体操作方法见《*****冻干粉针称量调剂操作规程》6.1.5 在称量配制室中，用另一个经灭菌的不锈钢桶接取一罐（约10-15L）注射用水。

先按照正常生产中的过滤速度（40％）通过2个串联的除菌滤器过滤注射用水，收集在无菌收集罐内。

再按同样操作进行培养基的除菌过滤，所配制的培养基过滤体积为100000ml。

6.1.6 无菌灌装操作人员先将盛装注射用水的滤后收集罐连接在灌装机上，设定灌装量为1.50±0.02ml/支。

前7小时用10％灌装速度，灌装注射用水，模拟灌装机的动态运转状态。

之后更换为装有滤后培养基的收集罐，排出管路中的气泡，取开始灌装的22支，在灌装机上半加塞后手工压至全加塞，作为模拟半成品检测的样品。

然后进行滤后培养基的无菌灌装。

灌装过程中每15分钟进行一次模拟装量检查，取2支灌装后的西林瓶作为剔除，并不实际测量装量，但作为剔除数计算到物料平衡中。

此次验证模拟从除菌过滤结束至无菌灌装结束必须满足12小时。

灌装培养基的过程中进行各种正常干扰和非正常干扰的模拟。

具体干扰内容清单见6.1.11和6.1.12。

灌装具体操作方法参见《*****冻干粉针灌装操作规程》6.1.7 在灌装过程中，每个收集盘装载330-340支左右的西林瓶，灌装支数不少于18盘。

超过规定盘数如果仍有培养基剩余则不再灌装，剩余培养基转移到另外的容器中并作好标记，单独进行培养，为无菌检查提供信息。

灌装过程中，如果有胶塞掉在西林瓶轨道上，造成卡瓶或碎瓶的情况，或者有其他需要操作人员伸手进入灌装机围档内进行操作的情况，则需要将灌装机上当时所有未加塞西林瓶剔除（待运行到收集工位时）。

已加塞完毕的样品放入单独盘中，标记为“剔除”，单独进行培养，为无菌检查提供信息，但不计入最后结果判定用总数量中。

未加塞的西林瓶按废弃处理。

所有剔除的瓶子在最后进行物料平衡计算时要包括进去。

6.1.8. 在开始灌装前，对LYOMAX5.0爱德华冷干机进行CIP、121℃30分钟SIP和泄漏测试的操作，具体操作参见《LYOFLEX 5.0爱德华冷干机运行操作规程》6.1.9 将灌装后西林瓶分别放入LYOMAX5.0爱德华冻干机内。

摆放顺序规定为由上至下，从左至右，从内至外。

每层装载3盘培养基样品，并装载1盘空瓶以保持冻干机内平衡，共24盘，见下图中A1, A3, A7, A9, B1, B3, ……。

其中A9、B9、C9、D9、E9、F9为空瓶盘。

B1B2B3B4B5B6B7B8B9A1A2A3A4A5A6A7A8A9C1C2C3C4C5C6C7C8C9D1D2D3D4D5D6D7D8D9E1E2E3E4E5E6E7E8E9F1F2F3F4F5F6F7F8F9图2 LYOMAX5.0爱德华冻干机摆放图6.1.10:灌装全部结束时关闭LYOMAX5.0爱德华冻干机的门。

开启冻干机，模拟冻干过程如下：6.1.10.1板层降温至5℃后装载产品6.1.10.2板层降温至5℃保持60分钟6.1.10.3 开启冷凝器降温60分钟，保证低于-45℃。

6.1.10.4 然后开启真空泵，抽真空至前箱压力达到0.35bar时关闭真空泵。

6.1.10.5 真空模拟30分钟（控制产品温度不低于3℃，前箱压力保持0.35±0.02bar）。

6.1.10.6 补空气破真空并全压塞。

6.1.10.9全压塞后对西林瓶进行轧盖操作。

为区分各盘样品，出箱后将灌装后样品按盘号单独放到轧盖机上料盘，分别进行轧盖操作。

轧盖后收集至原收集盘内，并做好标记。

进箱方向6.1.11灌装中的正常干扰因素（如无注明，均为在培养基灌装中进行）序号因素次数至少具体实施灌装室人员（最多）灌装人员QA监督员维修人员Z1 装量检查23 灌装注射用水时检查3次（每2小时一次），灌装培养基时检查20次（每15±3分钟一次），3 1 --Z2 调节加塞高度 2 开始灌装和灌装量到达第5盘时进行3 1 --Z3 处理胶塞轨道堵塞8 每4盘进行一次(包括WFI灌装) 3 1 -- Z4 空瓶/破瓶剔除 4 每4盘进行一次 3 1 -- Z5 胶塞上料8每4盘进行一次(包括WFI灌装) 3 1 -- Z6 换班至少3 灌装过程中每次有人员离开灌装室 3 1 -- -- 环境监测-- 具体见6.2 3 1 --6.1.12 fill)培养基灌装中的非正常干扰因素（如无注明，均为在培养基灌装中进行）序号因素次数具体实施灌装室人员（最多）灌装人员QA监督员维修人员F1 灌装速度为40% 1 前10盘使用40％灌装速度进行灌装，第11盘开始恢复正常灌装速度85％3 1 --F2 灌装机停机60分钟以上1灌装完第11盘时，停止灌装60分钟，然后重新排气泡，继续灌装3 1 --F3 设备维修 1 灌装完第14盘时进行一次设备维修，打开灌装机台面下控制箱，模拟检查维修。

维修时间约90分钟，之后用70％乙醇对西林瓶灌装机台面上各部件进行擦拭，后继续进行灌装。

3 1 1F4 更换灌装机组件 1 在设备维修（F3）进行同时将灌装机组件拆下，重新清洗并湿热灭菌，再安装到灌装机上，用70％乙醇对西林瓶灌装机台面上各部件进行擦拭，待F3结束后继续进行灌装。

3 1 --6.1.13 /灌装成品各盘对应干扰因素a.培养基盘数正常干扰非正常干扰.序号Z1 Z2 Z3 Z4 Z51 灌装注射用水时每两小时进行一次，灌装培养基时每15分钟一次。

√√F12 √F13 √F14 F15 √√F16 √F17 √F18 F19 √F110 √F111 √F212 F213 √F214 √F3、F415 √F3、F416 F3、F417 √F3、F418 √F3、F4b. WFI/注射用水正常干扰盘数次数总计1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13Z1 /灌装注射用水时每两小时进行一次。

3 Z3 √√√ 3Z5 √√√ 36.2 环境监测无菌灌装过程中的环境检测按照正常动态监测进行，环境监测记录和压差记录参见附件。