SDS沉淀法实验流程（以动物组织为例）
聚合酶链式反应（PCR) 复合扩增PCR 核酸印迹法
聚合酶链式反应（PCR)
聚合酶链式反应（PCR)是体外酶促合成特异 DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火、 适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行， 使目的DNA迅速扩展。
具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时 等特点。
转基因食品 的检测方法
普通大米(左）与黄金大米(右) 的比较。 黄金大米是一种转基因稻米品种，由美国 先正达种子公司参与研发。
非
五颜六色的玉米！
当香蕉遭遇转基因，太厉害了！
转基因食品的安全性越来越受到广泛关注，虽然迄今
为止尚未发现有证据表明转基因食品对健康和环境存在危害，
但由于转基因食品安全性评价具有积累性和潜在性特点，并
3.适温延伸（70℃-75℃）：在 Taq酶 （在72℃左右，活性最佳）的作用下， 以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端 延伸，合成与模板互补的DNA链。
注：Taq酶<一种耐热的DNA聚合酶> dNTP<四种核苷酸，A、U、G、C的 混合物>
复合扩增PCR
复合扩增PCR是在同一反应管中含有一对以 上引物，可以同时针对几个靶位点进行检测的 PCR技术。
我国开发的转基因产品检测芯片基本上能实现： 确定是否是源基因食品、是哪一种源基因食品、 是否是我国已批准的源基因食品。目前研制的芯 片能检测国内外已批准商品化转基因作物物种： 大豆、玉米、油菜、棉花、马铃薯、烟草、西红 柿、木瓜、西葫芦、甜椒等。
是一种高通量、针对待测核酸中靶序列进 行定性和定量分析的新技术，它利用简单的 杂合、连接、及PCR扩增反应，于单一反应 管内可同时检测40个不同的核苷酸序列的拷 贝数变化 。
广泛应用于基因检测、基因诊断等多个领 域。
灵敏度高、操作简便、高通量检测
不用于单个细胞检测、不能检测染色体平 衡易位
酶联免疫吸附是一种酶联免疫技术。用于检测包被于固相 板孔中的待测抗原（或抗体）即：用酶标记抗体并将已知的 抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载 体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过 酶作用于底物后显色来判断结果。
核酸印迹法技术用于食品外源基因的检测可检测出外源基 因与内源基因有高度同源性的DNA片断，且准确可靠，但对 样品的纯度要求较高，费用也较高。
实时荧光定量PCR技术最早在1996年由美国Applied Biosysyems公司推出，是指在常规PCR基础上添加了 一条标记了两个荧光基团的探针，利用荧光信号积累 实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模 板进行定量的方法。
可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色 反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。
ELISA分析法特异性高、操作简单、成本低、稳定性好， 但如果食品中被检测蛋白浓度较低时会出现假阴性。
该法只适用于原料性食品，难应用于加工品（因为外源基 因表达的蛋白会因加工而失活、分解或消失）。
2、蛋白质印迹法 (Western Blotting)
SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55~65 ℃） 条件下能裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性， 释放出核酸。
提高盐（KAc或NH4AC）浓度并降低温度（冰 浴），使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉 淀。
上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用 乙醇沉淀水相中的DNA。
注：SDS法适用于大部分实验材料基因组DNA 提取。如动物组织、细胞、全血、细菌、酵母等。 具有经济、简便的特点。
蛋白质印迹法是一种分析和鉴定特定蛋白质的技 术。将经过凝胶电泳分离的蛋白质转移到膜上，以 固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗 体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起 反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离 的特异性目的基因表达的蛋白成分再对转移膜上的 蛋白质进行检测的技术。
该法将电泳较高的分离能力、抗体的特异性和放 射性自显影的灵敏性结合起来，对分析不溶性蛋白 有较好的效果。
荧光探针主要有三种：分子信标探针、TaqMan探 针、杂交双探针。
灵敏度很高，对加工、未加工和样品都可进行检测。
其实质就是高度集成化的反向斑点杂交技术。
探针分子固定在载体上，待测基因经过PCR、末 端标记等操作，完成标记有荧光染料或同位素的 核酸分子，然后与固定的探针杂交。
进行筛查、定性、定量，具有高通量、集成化 和自动化的特点。
用于基因分离、克隆、核酸序列分析、疾病 的诊断或任何有DNA、RNA的地方。
注：每一次实验均需要设有阴性及阳性对照以确保
实验结果可靠性。在样品采集及处理过程中也需要注 意防止污染。
1高温变性（90℃-95℃）：双链DNA 模板在热作用下， 氢键断裂，形成单 链DNA
2低温退火（55℃-65℃）：系统温度 降低，引物与DNA模板结合，形成局 部双链。
与社会、文化及伦理等多方面因素互为影响所以需要多方位
长期系统的监测才能对其安全性做出较为客观的评价，其中
转基因食品的检测技对术受检尤产为品重进行要鉴。定，区别转基因食
品与非转基因食品，筛选出在遗传分
化过程中已失去转基因特性的产品
检验
对受检产品中导入的基
因重组体构成的变异情 况进行检测
用
主要采
针对外源DNA进 行检测（核酸水 平的检测）
该技术不仅效率高，而且因为它是针对多个 靶位点进行同时检测，所以其检测效果较之普
通PCR更为可信。
核酸印迹法
以放射性或荧光标记的外源目的基因的同源序列作为探针 与该食品原料农产品的总DNA进行杂交。首先用限制酶消化 受体总DNA，通过琼脂糖凝胶电泳按大小分离所得的片断， 随后使DNA在原位发生变性，并从凝胶转移至一固相支持体 上。DNA转移至固相支持体的过程中，各个DNA片断的相对 位置保持不变，用放射性或荧光标记的探针与各个DNA片断 杂交，经放射自显影确定与探针互补的电泳条带的位置。
CTAB法原理(植物DNA提取经典方法)
CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离 子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。
该复合物在高盐溶液中（>0.7mol/L NaCl）是可溶的， 通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入 乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
CTAB法实验流程
SDS沉淀法原理
针对外源蛋白质 进行检测（蛋白 质水平的检测）
1、核酸的提取 2、定性筛选PCR技术 3、实时荧光定量PCR法 4、基因芯片检测法
பைடு நூலகம்
定性检测 定量检测
对于食品中转基因成分的核酸检测首先要进行核酸
的提取，尤其是DNA的提取具有其特殊性。
提取转基因相关食品中的DNA的2种方法： CTAB法 SDS沉淀法