DNA提取常见问题
问题一:DNA样品不纯,抑制后续酶解和PCR反应。
•重新纯化DNA,过吸附
柱去除蛋白、多糖、
多酚等杂质
•重新沉淀DNA,让酒精
充分挥发
•增加70%乙醇洗涤的
次数(2-3次)
•加入RNase降解RNA
DNA 提取常见问题
问题二:DNA 降解。
1.
材料不新鲜或反复冻融2.
未很好抑制内源核酸酶的活性3.
提取过程操作过于剧烈,DNA 被机械打断4.
外源核酸酶污染5.
反复冻融 1.尽量取新鲜材料,低温保存材料避免反复冻融2.液氮研磨或匀浆组织后,应在解冻前加入裂解缓冲液3.在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA 时,可增加裂解液中螯合剂的含量,细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔4.所有试剂用无菌水配制,耗材经高温灭菌5.将DNA 分装保存于缓冲液中,避免
反复冻融
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DNA 提取常见问题
问题三:DNA 提取量少。
1.尽量选用新鲜(幼嫩)的材料
2.植物要匀浆研磨充分
3.增加吸附的时间,或低温沉淀
4.小心操作
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