实验二牛黄解毒片的鉴别
一、实验目的
1.掌握中药制剂理化定性鉴别的方法和原理。

2.熟悉牛黄解毒片的理化定性分析和薄层定性检识。

二、仪器与试药
1.仪器
微量升华装置 TLC装置恒温水浴锅显微镜滤斗
定性滤纸乳钵酒精灯
2.试药
牛黄解毒片规格：0.3g/片胆酸对照品乙醇镁粉盐酸
氢氧化钠过氧化氢 1％香草醛硫酸溶液二氯甲烷过氧化氢
三、实验原理
根据中药制剂中某些有效成分的理化性质不同而进行鉴别；利用对照品作为对照进行TLC检识，以鉴别中成药的真伪。

四、实验内容
1.牛黄解毒片显微鉴别
取本品片芯，研成粉末，取少许，置显微镜下观察：
(1)草酸钙簇晶大，直径60～140 m。

(2)不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽。

2.牛黄解毒片定性鉴别
（1）理化鉴别：取本品6片，(除去包衣)，研细，加乙醇10mL，温热10分钟，滤过，滤液作如下反应：
①取滤液5mL，加镁粉少量与盐酸0.5mL，加热，即显红色。

②另取滤液4mL，加氢氧化钠试液，即显红色，再加30％过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸成酸性，则红色变成黄色。

（2）微量升华定性鉴别：取牛黄解毒片1片，研细，进行微量升华，所得白色升华物，加新制的1％香草醛硫酸溶液2滴。

液滴边缘渐显玫瑰红色。

（3）牛黄解毒片的TLC鉴别：
薄层板制备：硅胶G板(手工铺板或预制板)。

牛黄的TLC定性鉴别：
①供试品溶液制备：取本品2片，研细，加二氯甲烷15mL，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，加乙醇0.5mL溶解，作为供试品溶液。

②对照品溶液制备：取胆酸对照品，加乙醇制成每mL含2mg的溶液，即得。

③点样与展开：分别吸取上述溶液各5mL，点于同一硅胶G板上，以正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇(20:25:2:3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10分钟，置紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

大黄的鉴别：
①供试品溶液的制备
取本品1片，研细，加甲醇20mL,超声处理15min,滤过，取滤液10mL,蒸干，残渣加水10mL 使溶解，加盐酸1mL,加热回流30min,放冷，用乙醚振摇提取2次，每次20mL,合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷2mL使溶解，作为供试品溶液。

②对照溶液的制备取大黄对照药材0.1g,同法做成对照药材溶液。

再取大黄素对照品适
量，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。

②薄层层析
吸取上述三种溶液各4uL,分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30-60℃）-甲酸乙酯-甲酸的上层（比例自行设定）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

另置氨蒸汽中熏后，日光检视。

五、注意事项
1.注意微量升华操作的方法。

2.TLC鉴别时注意点样量的控制和点的位置。

六、思考题
1.牛黄解毒片鉴别反应各检识什么药物？
2.试述理化定性鉴别反应与TLC法定性各有何特点？
七、参考文献
《中国药典》2010年版一部，387，化学工业出版社。