钙离子成像
一、实验目的
钙是人体的重要组成成份，它广泛分布于全身各组织器官中，正常人体的钙占体重的1.5%-2.0%。

在人体中的含量居第五位。

钙离子与神经递质的释放、肌肉收缩以及凝血过程等生理过程都有重要关系，因此钙离子的检测对人体了解相关的生理活动非常的重要。

二、实验仪器
硬件设备：
✧ 1.Olympus 倒置显微镜 IX71
✧ 2. TILL单光仪
✧ 3.EM-CCD（HAMAMATSU C9100）
✧ puter
软件模块：SimplePCI 6.5
三、实验原理
测量钙离子的合成指示剂分为单波长激发指示剂、双波长激发指示剂和双波长发射指示剂3种。

①波长激发指示剂：Quin-2
是第1代荧光指示剂，在340 nm处激发，505nm处可观察到结合Ca2+的发射峰强度的增加。

用于测定静息状态或接近静息状态下的细胞内Ca2+的浓度，无法检测 1μM以上的Ca2+浓度
②双波长激发指示剂：Fura-2
Fura-2是第2代荧光指示剂，当介质中无钙时，Fura-2的激发峰为380nm；当与钙结合后，激发峰向短波方向移至340nm，所以采用激发比例荧光测量。

进入细胞的Fura-2随时间推移将泄漏到细胞外，所以应尽量缩短测定时间。

③双波长发射指示剂：Indo-1
Indo-1为单波长激发(340nm)和双波长发射(405和506nm)指示剂，其优点与
Fura-2相同。

Indo-1已经在流式细胞研究中广泛使用。

测量340nm和380nm激发下的发射荧光强度：
F
340和F
380
→R= F
340
/ F
380
校准
[Ca2+]
i =K
d
(R-R
min
)/(R
max
-R)(nmol/L)
R
max
是加入0.1%的TritonX-100破坏细胞膜后所得到的最大荧光强度比值；
R min 为加入5μM的螯合剂EGTA后测得的最小荧光强度比值。

K
d
为Fura-2与钙离
子反应的解离常数，大小为224nmol/L.
四、实验结果。