❖ 染色
用石炭酸复红覆盖印迹，染色约1分钟后水洗。
❖ 镜检
干后用油镜观察。
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营养菌丝
❖ 又称为基内菌丝、基质菌丝或一级菌丝； ❖ 是孢子发芽后不断伸长、分枝并放射状在
培养基内部和表面形成的大量色浅、较细 的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的丝 状结构。 ❖ 空间位置位于下层。
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气生菌丝
❖ 又称为二级菌丝； ❖ 是由基内菌丝向上向空间方向分化形成的颜色
3
分布：含水量较低、有机物丰富、呈微碱性的土壤中。
估计每克土壤中约含放线菌孢子107个。
应用：放线菌对人类最突出的贡献就是它能产生大量的、
种类繁多的抗生素。放线菌还是酶类、维生素的生产 菌；有的放线菌有固氮能力；放线菌在自然界物质循 环中也起着重要作用，由于它们具有较强的分解复杂 有机物的能力，对于土壤肥力的提高也有重要作用。
实验十一、线菌形态的观察
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实验的目的要求
❖ 学习并掌握观察放线菌形态的基本方法 ❖ 初步了解放线菌的形态特征
2
放线菌是一类具有丝状分枝的单细胞，主要以外生孢子
的形式繁殖，革兰氏阳性，与细菌同属原核微生物。放 线菌菌菌落中的菌丝常从一个中心向四周辐射状呈放射 状生长，并因此而得名。放线菌有特殊的土霉味。
危害：只有极少数放线菌对人类构成危害，某些放线菌
属菌种引起动物放线菌病（皮肤、脑、肺和足部感 染），某些诺卡氏菌属菌种引起人和动物的诺卡氏菌 病；还有少数放线菌能引起植物病害。
4
孢子丝 气生菌丝
营养菌丝
5
营养菌丝和气生菌丝形态比较
营养菌丝
气生菌丝
位置
颜色 直径
在培养基内和表面 位于下层 浅 细
在培养基上方 位于上层 深 粗
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印片法
❖ 倒平板 ❖ 接种
❖ 培养 ❖ 印片
用接种铲或解剖刀将菌苔连同培养基切下一小块，菌面朝上放在一载 玻片上，取另一块载玻片在酒精灯上略微加热后，盖在菌苔上，轻 轻按压，使培养物（气丝、孢子丝或孢子）黏附在微热的载玻片上， 印迹朝上，通过酒精灯火焰2-3次固定。 不要用力太大压碎琼脂，也不要错动，以免改变放线菌自然形态
❖ 这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察 不同生长期的形态特征。
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玻璃纸法
❖ 倒平板 ❖ 铺玻璃纸
无菌操作用镊子将灭菌的玻璃纸铺在高氏I号琼脂表面，用无菌玻璃涂 布棒将玻璃纸压平。
❖ 接种
用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在玻璃纸上划线接种。
❖ 培养
将平板倒置，28C培养3-5天。
❖ 镜检
在洁净载玻片上滴一滴水，用镊子小心取出玻璃纸，菌面朝上平贴在 载玻片上，显微镜观察。
勿碰动玻璃纸菌面的培养物；玻璃纸与玻片间勿留气泡；
先低倍再高倍观察
12
印片法原理
❖ 将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载玻 片上，经染色后观察。这种方法主要用于观察 孢子丝的形态，孢子的排列及其形状等。
❖ 方法简便，但形态特征可能有所改变。
较深、直径较粗的分枝菌丝。 ❖ 空间位置位于上层。
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孢子丝
❖ 孢子丝是由气生菌 丝分化形成的各种 形状和着生方式的 丝状结构。
❖ 形态多样：有直、 波曲、钩状、螺旋 状、轮生等。
❖ 空间位置位于上层。
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单轮生
螺旋状
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宜用略暗光线；先低倍再高倍观察；染色后效果更好（0.1%吕氏碱性美蓝）
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玻璃纸法原理
❖ 玻璃纸是一种透明的半透膜，具有半透膜特性，其透光 性与载玻片的基本相同，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平 板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线 菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固 定在载玻片上直接镜检。
❖ 这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特 征，而且便于观察不同生长期的形态。
9
插片法
❖ 倒平板 ❖ 接种 ❖ 插片
无菌操作用镊子将灭菌盖玻片以大约45角在接种线上插入琼脂内。
❖ 培养
将插片平板倒置，28C 培养3-5天。
❖ 镜检
用镊子小心拔出插片，用纸擦去背面培养物，将有菌的一面朝上放在 载玻片上，直接显微镜观察。
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实验材料
❖菌种：细黄链霉菌和青色链霉菌
❖培养基：高氏I号琼脂 ❖仪器和用具
➢载玻片 ➢ 显微镜
➢盖玻片 ➢ 镜头纸
➢滤纸
➢ 接种环
➢平皿
➢ 接种铲
➢玻璃纸 ➢ 镊子
➢玻璃涂棒
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❖插片法 ❖玻璃纸法 ❖印片法
方法
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插片法原理
❖ 将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片 后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻 片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时， 轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。