（3）实验室应向样本采集人员明确以下信息（如有可能体现在申 请单中），具体包括：采集时间；采集部位；样本类型；采集量；采 样质量的要求；拒收样本的类型。
（4）样本运送和保存中的生物安全。
样本的采集、运送和保存（2）
（5）样本运送温度和时间的要求。DNA检测样本，可室温下运送， 建议8h内送至实验室。靶核酸为RNA时，10 min可室温运送，如所需 运送时间较长，则应将样本置于冰上，必须保证样本与冰屑充分接触， 且冰屑应达到样本的高度，建议采集后4h内送到。 冰冻组织样本最好 保证其在运送过程中不发生融化，石蜡包埋组织则可在室温下运送。
基因扩增仪器设备的质控
仪器设备
扩增仪
加样器 水浴箱 酶标仪
质控方法
频度
仪器校验实验 当仪器移动时
热电偶监测温度 每月一次
扩增功能检测 每 4 个月一次
程序打印
校准
温度检测
预防性维护 及校准
每次测定时 每年 2 次 每次实验 每年 2 次
失控标准
实验失败 如靶温度或温度 差异超出允许范 围
待测孔未出现扩 增，检测温度
（通过检查和提供客观证据证明，对一特 定预期用途的要求始终能得到满足）
The FDA and ISO terms for verification and are similar, with the distinction having to do with intended use. （性能验证和性能确认 FDA和ISO术语相似，差异在后者的“预期 用途”）
实验室应根据自己的检验项目、所采用的检测技术平台和工作量来决定分区的多 少及各区域的空间大小。
至少具体需要多少个区，同样是“个体化”的，以“工作有序、互不干扰、防 止污染、报告及时“作为基本原则。
缓冲间的功能是“控制空气的流向”。 生物安全柜可考虑“A2”。
产前筛查与产前诊断（全基因组低拷贝测序技术）
validation定义为，证明所使用的一个程序、过程、系统设备 或方法能按预期进行工作以及取得预期结果的活动（或过 程））
“validation” 通俗一点的定义
the term “validation” will be used to refer to the analytic performance characteristics that need to be initially established at the time of assay
测序区空气流向 缓冲间扩增 与检测区 空气流向缓冲间
标本与文 库制备区 空气流向
缓冲间
试剂准备区
空气流向 缓冲间
专用走廊工作流向标本与制备区 扩增与检测区测序区
植入前胚胎遗传学诊断(全基因组低拷贝测序)
电泳区 空气流向 缓冲间增一区 空气流向 缓冲间
检测
每个浓度2~3个重复检测，进行多项回归分析
分析敏感性，测定下限 CLIA不要求，但CAP要求对定量进行LOD验证， 60个数据点（例如在预计的检测下限范围内5个样本，12次重复），研究时间5天，
（LOD）研究
使用在5天内收集的20个数据点
development. （指在测定方法研发时，最 早建立的分析性能特征）
性能验证与性能确认的实际操作区别
性能指标及所建议的 研究
可报告范围, 线性范围研 究(定量检测)
要求
FDA批准的检测
实验室自建方法或自配试剂（LDT）
覆盖所述线性范围内5~7个浓度，每个浓度双份 覆盖预计测定范围内（或超出所确定的最宽的可能范围的20〜30%）7~9个浓度，
“intended use”预期用途
The term “intended use” in these documents is established by the manufacturer or developing laboratory at the time of assay development and has to do with the purpose and population for which the test was intended (e.g., diagnosis, following treatment, etc.). Relevant performance characteristics are then determined based on the intended use of the test.
使用某特定检测试剂或系统的实验室按照所提供的试
剂盒或检测系统说明书使用时，能复现生产厂家
所宣称的检测性能。）
如果不按商品 试剂盒说明书 操作或改变商 品试剂盒组份 是否可以？
可以
但属于实验室自 配试剂或自建方 法，亦即 Laboratorydeveloped tests, LDTs)
“性能确认”（“validation” ）定义
3. 所申请的检验项目； 4. 患者的相关临床资料，包括初步诊断结果； 5. 样本采集日期和采集时间； 6. 实验室接受样本的日期和时间； 7. 与检验有关的既往史等； 8. 样本是否合格：有无癌变组织、血液样本有无溶血、容
器有无破损等。 9. 医生的签名。
患者的正确识别
样本的采集、运送和保存（1）
1. 基本原则 （1）应按照CFDA批准的检测试剂说明书制订的标准操作程序
（SOP）进行。如为实验室自制试剂，则实验室应当建立样本的采集、 运送和保存的SOP，并严格执行。

（2）样本采集和运送容器：密闭的、一次性、无菌、无核酸酶及其 他扩增抑制物。血液和骨髓穿刺样本通常需要先抗凝，抗凝剂一般应 EDTA和枸橼酸盐，避免使用肝素。如检测的靶核酸为胞内RNA，试 管内应含有一定量的RNA稳定剂。
用于肿瘤组织基因突变检测的样本，在分子检 测须由病理医师进行镜下肿瘤细胞评估，然后 富集肿瘤肿瘤细胞用于核酸提取。肿瘤细胞所 占比例应达到所用扩增检测方法的要求
纯化后的DNA和RNA的保存
DNA：如果纯化后的DNA无DNA酶的污染，则可 在TE缓冲液中室温保存26周；2-8℃保存一年；20℃保存7年；-70℃保存7年以上。怀疑可能存在 DNA酶污染的样本，则保存在-20℃以下。
Some people interpret “intended use” as referring to the relevant clinical laboratory in which the test is performed, rather than the manufacturer or developing laboratory, thus causing confusion. The World Health Organization (WHO) defines validation as “the action (or process) of proving that a procedure, process, system equipment or method used works as expected and achieves the intended result” . （WHO将
涉及实验室人 员和临床医生
质量 保证
室内质控 （分析中）
涉及实验室
室间质评 （分析中）
涉及实验室
分析前质量保证
申请单应包括的内容
1. 患者的惟一标识：患者的姓名、出生日期、性别、民族、 住院号、就诊科室、床号，有条件的医院尽量使用条码标 志或其他唯一标示；
2. 样本的类型：血液、其他体液、活检组织、手术切除样 本等；
常见标本的类型
血液 分泌物 胸腹水 痰 粪便 尿 脑脊液 胚胎样本 骨髓穿刺样本/细针穿刺细胞 组织（新鲜组织、活检组织、手术切除样本、甲醛固定的石蜡包埋组
织（FFPET） ）
临床分子诊断样本的接收
样本拒收标准：容器破损、量不够、时间不符 合要求、重度溶血、重度脂血、重度黄胆、无 靶细胞？
打印程序不对
不符合要求
不符合要求
不符合要求
理想的试剂
试剂方法的性能验证及每批试剂的质检 性能指标：
精密度（重复性） 准确性（定量：回收率、标准物质等；定性：方法学比较等） 线性范围（定量） 分析特异性 测定下限 抗干扰能力
“性能验证”（“verification”）定义
“verification”： broadly as “confirmation through the provision of objective evidence, that specified requirements have been fulfilled” . （广义为通过提供客观证据证明特定 的要求得到满足）
CLIA uses the term “verification”： specifically to relate to confirmation that the laboratory using a test can replicate the manufacturer’s performance claims when the test is used according to the package insert. （CLIA性能验证术语特指
DNA打断区
空气流向
空空气气流流向向
空气流向
缓冲间
缓冲准备区
空气流向
空气流向
缓冲间
缓冲间
专用走廊
实验室仪器设备及管理
加样器：维护、校准 扩增仪：维护、校准 恒温干浴仪或水浴箱：维护、校准 离心机：维护 生物安全柜：维护 冰箱：维护
（6）样本保存温度和时间的要求。用于DNA检测时，样本可在2~8℃ 保存72h。用于RNA检测时，样本一旦采集送达实验室后，如不能立 即提取，应冻存于-70℃。临床体液样本的长期保存（>2周）在保存 于-70℃。已提取纯化的RNA最好在乙醇沉淀后保存在-70℃。如果样 本中含有红细胞，应尽可能去除红细胞后，再进行冻存。石蜡包埋组 织则可在2-8℃长期保存。