有能合成分解尿素的脲酶的细菌才能生长。
（二）统计菌落数目：
1、活体计数法（稀释涂布平板）
（1）操作方法：
稀释涂布平板→统计菌落数
（2）原理：
1个菌落→1个活菌
（3）统计原则
①选 30∼300 个菌落的平板统计
②每个稀释度取3个平板取其平均值
第一位同学只涂布了一个平板，没有设置 重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学设置了重复组，涂布了3个平板， 但是，其中1个平板的计数结果与另 2个相差太
A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。 一是由于土样不同，二是由于培养基污染或培养基混有
其它氮源。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实 验方案有两种。一种方案是可以接种其它菌种，看是否 有菌落的出现，验证培养基是否混有其它氮源。另一种 方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培 养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 所以，在实验中一般都应设置对照组，使实验更有 说服力。
五、结果分析与评价
1.培养物中是否有杂菌污染以及选择
培养基是否筛选出菌落
对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，
说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的
菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选
择培养基已筛选出一些菌落。
2.样品的稀释操作是否成功
如果得到了2个或2个以上菌落数目在
30～300的平板，则说明稀释操作比较成
功，并能够进行菌落的计数。
3.重复组的结果是否一致 如果各位同学选取的是同一种土样，统计的结
果应该接近。如果结果相差太远，则需要从各项操
作过程中去分析、寻找可能的原因。
六、课 题 延 伸
能分解尿素的细菌的鉴定 鉴定的原理： 细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基 的pH升高。 鉴定方法：
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指
一、 筛选菌株
原理 人为提供有利于目的菌株的条件（包括营养、 温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生
长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养
基，称做选择培养基。
能分解尿素的细菌的筛选
1、在培养基的配方中，为微
（一）筛选菌株 生物的生长提供碳源和氮源的分别是 KH2PO4 1.4g 是什么物质？ NaHPO4 2.1g 碳源是葡萄糖，氮源是尿素。 MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 2.分析该配方的培养基对微 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 生物是否具有筛选作用？如果有， 将上述物质溶解后， 又是如何进行筛选的？ 用蒸馏水定容到 1000mL。 有筛选作用，它的氮源只含有尿素，只
㈤.微生物的培养与观察 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数 目。
◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30— —300的平板，则说明稀释操作比较成功， 并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数 的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不 精确，需要重新实验。
示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基
的颜色变化。
1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（ A ） A.在液体培养基上进行 B.至少接种一种细菌 C.接种一个细菌 D.及时补充消耗的营养物质 2.使用选择培养基的目的是（ C ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) D A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素
㈣.取样涂布
◆实验时要对培养皿作好标记。注明培 养基类型、培养时间、稀释度、培养物 等。
㈣.取样涂布
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
稀释倍数 目的
细菌
104、105、106
放线菌
真菌
103、104、105
102、103、104
ห้องสมุดไป่ตู้
保证获得菌落 数在30～300 之间、适于计 数的平板
原因：不同微生物在土壤中含量不同
二.实验的具体操作
㈠.土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层 土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的
信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用
前都要灭菌。
㈡.制备培养基：
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
[三]样品的稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 火焰旁进行
5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中 加入（ C ） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐
用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的 数目，其结果与实际值相比（ ） A.比实际值高 B.比实际值低 C.和实际值一致 D.比实际值可能高也可能低
远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，
不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。
在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，
作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。 在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组 的结果是否基本一致，结果不一致，意味着操作 有误，需要重新实验。
（二）统计菌落数目 1、活菌计数法 为什么？ （4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的 实际数目低，因此统计结果一般用菌落数表 示。 每克样品中的菌株数=（C/V)* M C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V:所用稀释液的体积；M:稀释倍数。
课题2
一、课题背景
尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸 收利用 细菌脲酶 CO(NH2)2+H2O CO2 +NH3
示
标
1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 2.统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌
躬 学
• 阅读教材P21-23
知道尿素被分解的反应式 实验室中微生物的筛选，原理是什么? 思考P22〈旁栏思考〉 统计菌落的方法是什么，结果用什么表示？ 设置对照的目的是什么?
2、显微镜直接计数
㈡.统计菌落数目： 1、显微镜直接计数：
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里 样品中微生物的数量。
缺点
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
三、设置对照
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试 因素对实验结果的影响
实践训练
4.下列说法不正确的是（ B ） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚 合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、 M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因 素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大， 种类最多。