三、发酵培养基的选择

一）、配置培养基的原则 1、根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基 2、注意各营养物质的浓度和配比 3、调节适宜的物理化学条件


4、根据培养微生物的目的配置
5、尽量使用廉价易得的原料
二）、配置培养基的方法

1、生态模拟 2、查阅文献


3、借助优选法或正交试验法精心设计培养基配方

例如：微生物发酵生产甘油中，例如亚硫酸氢钠， 它与代谢过程中的乙醛生成加成物。

7.水分 功能：生化反应均在水溶液中进行
二、培养基的类型



1.依营养物质的来源分类 天然培养基； 合成培养基，也称组合培养基（多用于定量研究）； 半合成培养基，（用的最多，在部分天然有机碳源、 氮源、生长因子的基础上，适当加入一些化学药品）；


2）半固体培养基 配置好的液体培养基中加入0.5%左右的琼脂 作为凝固剂，形成的培养基称之微半固体培养 基。 主要用于菌种鉴定，观察细菌运动特征及噬 菌体的效价测定等

3）液体培养基； 培养基中80～90%是水。



3.依培养基的用途来分 1）、孢子培养基 2）、种子培养基 3) 、 发酵培养基 4）、补料培养基 5）、加富培养基 6）、选择培养基 7）、鉴别培养基 8）、增殖和保存培养基 9）、富集培养基 10）、测定培养基


2.依培养基的物理状态来分： 1）固体培养基 A、凝固培养基 ：即遇热可融化，冷却后则凝固的固 体培养基 B、非可逆性凝固培养基：指有血清凝固成的固体培 养基或由无机硅胶配成的凝固后即不能再融化的固体 培养基 C、天然固体培养基：由天然固体状基质直接制成的 培养基，如麸皮，米糠，木屑等 D、滤膜：是一种坚韧且带有无数微孔的醋酸纤维薄 膜，把它制成圆片状覆盖再营养琼脂或浸有培养液的 纤维衬垫上，就形成了具有固体培养基性质的培养条
4、实验比较 实验的规模一般由定性到定量，由小到大。 发酵培养基的用途与要求、成分、配比经实验确定，配制时兼顾 原料来源、成本及工艺管理；（举例1 ，2，3）
培养基配方举例

牛肉膏蛋白胨培养基(常用的细菌培养基)
牛肉膏5克 蛋白胨10克 NaCl5克 水1000毫升 pH7.2～7.4 (琼脂15～20克)
第二章 培养基的制备与灭菌

1、培养基的组成？如何选择培养基？ 2、如何制备培养基？ 3、如何对培养基进行灭菌？
第一节 培养基的原材料


一、培养基的营养成分及用途
光 光能自养 自养菌 氢、硫、氨 化能自养 1.能源 亚硝酸盐、亚铁盐 碳水化合物等有机物 石油天然气和石油化工产品（如醋酸） 异养菌

第二节 淀粉水解糖的制备

一、淀粉水解糖的制备方法 1、酸解法： 定义：以酸（无机酸或有机酸）为催化剂，在高温高 压下将淀粉水解为葡萄糖的方法. 优点：设备要求简单，水解时间短（20min），设备 生产能力大 缺点：高温高压下进行，设备要求耐腐蚀、耐高温、 耐高压，副反应多，对原料要求严格，淀粉颗粒不宜 过大，淀粉乳浓度不能过高。



2、酶解法：（双酶水解法） 定义：用淀粉酶将淀粉水解为葡萄糖的过程。一般 分为两步：第一步是利用α－淀粉酶将淀粉液化转为 糊精及低聚糖，使淀粉的可溶性增加，这个过程称为

高氏一号培养基(常用的放线菌培养基)
可溶性淀粉20克 KNO31克 K2HPO40.5克 MgSO40.5克 NaCl 0.5克 FeSO40.01克水1000毫升琼 脂15～20克pH7.4～7.6


察氏培养基(培养霉菌用) 蔗糖 20克 NaNO33克 K2HPO41克 KCl1克 MgSO40.5克 FeSO40.01 克 琼脂20克 水1000毫升自然pH 无氮培养基(培养自生固氮菌用) 葡萄糖 10克 NaCl0.2克 KH2PO40.2克 CaSO4· 2H2O0.1克 MgSO40.2 克 CaCO35克 琼脂 20克水1000毫升自然pH


功能：生长、繁殖需要；


碳酸气 2.碳源 淀粉水解糖、糖蜜、亚硫酸盐纸浆废液等 石油、正构石蜡、天然气 醋酸、甲醇、乙醇等石油化工产品



功能：提供能量、构成菌体、代谢产物的物 质基础；

有机氮：黄豆饼粉、花生饼粉、玉米浆、蛋白胨、 3.氮源 酵母粉、鱼粉、发酵菌丝体、酒糟水等


无机氮： 尿素、硫酸铵、氨水、硝酸盐

2）、促进剂：指那些既不是营养物又不是前
体，但却能提高产量的添加剂。

比如在酶制剂发酵过程中，加入诱导物、表明活性剂及其它一些 产酶促进剂（比如吐温80、植酸、洗衣粉等）

3）、抑制剂：在发酵过程中加入抑制剂会抑制某些代
谢途径的进行，同时会使另外一些代谢途径活跃，从
而获得人们所需要的某种产物或使正常代谢的某一代 谢中间物积累起来。

1）、前体：指某些化合物加入到发酵培养基中， 能直接被微生物在生物合成过程中结合到产物
分子中去，而其自身的结构没有多大的变化，
但产物的产量却因加入前体而有较大的提高。

如：在青霉素生产中加入玉米浆，青霉素产量可从20u/mL增加 到100u/mL，研究发现玉米浆中的苯乙胺被有限结合到青霉素分 子中，从而提高了青霉素G的产量。

功能：构成菌体、含氮代谢物；


磷酸盐、钾盐、钙盐等矿物盐 4.无机盐

铁、锰、钴等微量元素

功能：构成菌体，参与酶的组成，维持酶活 性，调节渗透压，调节pH值，维持氧化还原 电位；

5.特殊生长因子：硫胺素、生物素、对氨基苯
甲酸、肌醇等

功能：酶的辅助部分，维持生命活动；

6．发酵的促进剂与抑制剂 发酵培养基中某些成分的加入有利于调节产物 的形成，而并不促进微生物的生长，这些物质 包括前体、促进剂和抑制剂



伊红-美蓝培养基(检查肠道细菌用)
蛋白胨 10克 K2HPO42克乳糖10克琼脂25克，水1000毫升，pH7.6 2％伊红水溶液2毫升0.5％美蓝水溶液2毫升将乳糖、伊红、美蓝分别 灭菌后，加入灭菌的培养基中摇匀，倒平板。

四、原料转换及意义 1、节约原料，减低单耗，提高发酵单位和总 收率； 2、开拓新的原料资源和微生物资源：野生植 物淀粉、植物纤维、木屑水解物、石蜡、醋酸、 乙醇