（2）原理：PCF是利用双链DNA复制的原理，将基因的核苷酸序列不断地加以复制，使其数量呈指数方式增加。
利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。
（3 ）过程：目的基因DNA受热变性后解旋形成DNA单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下进行延伸，如此重复循环多次。
教3•此外，如果基因片段比较小，核苷酸序列又已知，也可以利用DNA合成仪用
化学方法直接人工合成。
二、基因表达载体（重组DNA分子或重组质粒）的构建：
【讲述】基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。
其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，冋时使目的基因能够表达和发挥作用。
学
fl 表达建体
n 越止子
墓固黑这IS悴樓衣as思考2 :
【拓展】一个基因表达载体的组成，除了目的基因夕卜，还必须有启动子、终止阅读课本第12页
子以及标记基因等。
图1 —4,讨论如何将启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首段，它是RNA聚合酶
识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA最终获得所需要的蛋白
目的基因与载体构建
成重组DNA分子？
过质。
终止子相当于一盏红色信号灯，使转录在需要的地方停止下来。
终止子位于基因的末端，也是一段有特殊结构的DNA片段。
标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来，如抗生素抗性基因就可以作为这种基因。
学生活动：
【分析】构建重组DNA分子的方法是用冋种限制酶分别切割目的基因与载体，
阅读课本第13页图1 —6,总结土壤农
程使它们露岀的黏性末端通过碱基互补配对而黏合起来，再用DNA连接酶将两个杆菌转化法的过程。
DNA片段缝合起来。
三、将目的基因导入受体细胞：
1.将目的基因导入植物细胞：一般采用农杆菌转化法。
其操作的方法是将目的思考3:
基因插入到土壤农杆菌的Ti质粒的T —DNA上，通过农杆菌的转化作用，使在将目的基因导目的基因进入植物细胞，并将其插入到植物细胞中染色体的DNA上，使目的基入动物细胞时，一般因的遗传特性得以稳定维持和表达（如图所示）。
为什么米用受精卵作
为受体细胞？
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I = 常H
晦年因龍
9
【拓展】
2•将目的基因
导入动
物细胞：一般采用
显微注射技术。
常用的动物细胞为 受精
卵。
再将注射了目的基因的受精卵，经胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌 性动物的输卵管或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。
3•将目的基因导入微生物细胞：
（1） 早期基因工程操作一般都采用细菌等原核细胞作为受体细胞， 其主要原因 是什
么？
【分析】原核生物具有 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 等，因此，早
期的基因工程操作都用原核生物作为受体细胞， 其中以大肠杆菌应用最为广泛。
（2） 在将目的基因导入到细菌细胞时，一般要用
CaCl2处理，为什么？
【分析】用Ca 2+
处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中 DNA 分子的生 理状态，这种细胞称为感受态细胞，在一定温度下更易吸收重组
DNA 分子。
四、目的基因的检测与鉴定：
【拓展】
过 1 •分子水平的检测：
（1） 检测转基因生物染色体的 DNA 分子上是否插入了目的基因， 要采用DNA 分
子杂交技术。
即将转基因生物的基因组
DNA 提取出来，在含有目的基因的
DNA
片段上用放射性同位素标记，以此作为探针，使探针与基因组 DNA 杂交，如果
显示出杂交带，就表明目的基因已插入染色体
DNA 中。
（2） 检测目的基因是否转录出 mRNA ，要采用DNA — RNA 分子杂交技术。
与 上述方法不同的是从转基因生物中提取的是
mRNA ，同样用标记的目的基因作
程 探针，与mRNA 杂交，如果显示出杂交带，则表明目的基因转录出了 mRNA 。
（3） 检测目的基因是否翻译出蛋白质，要进行抗原一抗体杂交。
是指从转基因 生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原一抗体杂交，若有杂交带出现，表 明目的基因已形成蛋白质产品。
2•个体水平的鉴定：例如，一个抗虫或抗病的目的基因导入植物细胞后，是否 赋予了植物抗虫或抗病
特性，需要做抗虫或抗病的接种实验，以确定是否具有 抗性以及抗性的程度。
【分析】做抗虫的接种实验，也就是让害虫吃棉花的叶片，观察害虫是否死亡。
【课堂总结】
学生回答：
原核生物繁殖速 度快。
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DNA 分子杂交的原理 就
是碱基互补配对原 则。
思考4:
如何鉴定一个抗 虫或抗病基因导入棉 花细胞后，是否赋予 了棉花抗虫或抗病的 特性？
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基因表达载休的构建 |人工合成 「| 土壤収幵菌转蘇
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1|导入微主物詡胞I
教学 反思 目的基因导入爱恨H 胞 巨刃基因的验测与鉴定。