高压液相色谱测雪碧中苯甲酸的含量
实验原理：高压液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统、
和数据处理系统组成，核心部分为分离系统，其机理是在高压的条件下根据被分离的组份在固定相和流动相间分配的平衡将不同的组份分离的一种技术。

从分析原理上讲高效液相色普法和经典液相色谱法没有本质的区别,但由于它采用了新型高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,使经典的液相色谱法焕发出新的活力。

高压液相色谱的优点是明显的,如:分离效果好、选择性高、检测灵敏度高、分离速度快等。

实验步骤：（1）实验仪器的准备：高压液相色谱仪未使用时柱子内充满了纯
甲醇，需要先使柱子内充满5%的甲醇和95%的水，然后再使柱子内的流动相换成5%的甲醇和95%的乙酸铵水溶液，当看到基线稳定时，仪器待用。

（2）雪碧的前处理：超声脱气法脱去雪碧中存在的二氧化碳等气体，用0.45微米的滤膜抽滤雪碧，稀释样品待测。

（3）标准品的准备：把标准品稀释成不同的浓度，分别为5,10,20,50，100这五个浓度待用。

（4）样品的测定：样品测定前先测定标准品的浓度，确定保留时间（被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，也即从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间）。

测定不同浓度的标准品，进样针需要润洗三至四次。

上样品：用样品润洗进样针5-6次，每次需完全润洗，但不能把样品针拔出，润洗完成后，缓慢吸取样品，达到最大刻度处，中间不能出现气泡；打开上样阀门，进样针缓慢插入进样孔指顶部，有阻力后继续前进，至不能前进，把进样针中的样品缓慢推入到样品孔中，拔出进样针，关闭上样阀门。

待测定结果出现后，保存测定结果，测下一样品。

直至测定结束。

（5）实验仪器的关闭：需要先使柱子内充满5%的甲醇和95%的水，然后再使柱子内的流动相换成纯甲醇溶液，关闭仪器，关闭计算机。

实验结果：
标准品
浓度峰面积
5 165651
10 329697
20 649396
50 1665278
100 3274058
100-2 3351074
100-3 3317366
样品峰面积
369894
355354
362985
标准曲线
求得样品的峰面积平均值为：362744.3333，带入公式求得样品中苯甲酸的浓度为：10.95703715
分析讨论：
⑴如何确定系统的稳定性？
答：可对同一个浓度的标准品进行多次测定，若结果无变化则系统稳定。

此实验对标准品的最大浓度100进行三次测定，三次结果相近，系统稳定。

⑵如何排除前处理对样品实验结果的影响？
答：可把不同浓度的标准品放入到雪碧中进行相同的前处理，排除前处理对实验结果的影响。

⑶如何排除调试pH值对样品结果的影响？
答：相隔一段时间后对同一样品进行再次测定，若结果无变化则无影响。

⑷如何确定样品的保留时间？
答：随着标准品浓度的增大，峰面积会对应增大，且明显，故可根据标准品定保留时间。