高效液相色谱法在药物分析中的应用与进展
摘要：主要介绍了高效液相色谱法在药物鉴别、药物杂质检查、药物含量测定等方面具体应用以及展望了高效液相色谱法在药物分析中的应用前景。
关键词：高效液相色谱法；HPLC；药物分析；联用技术
Abstract:Mainly introduced the high performance liquid chromatography in drug discrimination, drug impurity test, determination of the content and concrete application and the prospect of the high performance liquid chromatography in pharmaceutical analysis application prospect.
Keywords:high performance liquid chromatography，HPLC,pharmaceutical analysis，hyphenated techniques
引言：
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
HPLC在国内和国外的药物分析领域的应用范围很广，发展速度也很快，尤其在我国，近十几年来HPLC方法越来越受到重视。
HPLC 在药物的分析中的应用主要是鉴别、有关物质的检查、有效成分及含量的测定[1]；本文对高效液相色谱法（HPLC）技术在药物分析中的应用进行概述并展望其应用前景。
1 在药物分析中的应用
1.1 在药物鉴别中的应用
在HPLC 法中，药物组分的保留时间与其结构和性质有着直接的关系，不同
的药物由于结构和性质的差异在色谱图上的出峰顺序不同，是定性的重要参数，可用于药物的鉴别。
如在中国药典收载的药物利福平的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
如中国药典收载的利福平的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致[2]。
1.2 在杂质检查中的应用
高效液相色谱法（HPLC）分离效能高，灵敏，在药物的杂质检查中应用广泛。
主要用于药物中有关物质的检查。
“有关物质”是指药物中存在的合成原料、中间体、副产物、降解产物等物质，这些物质的结构和性质与药物相似，含量很低，只有采用色谱的方法才能将其分离并检测。
若杂质是已知的，又有杂质的对照品，可用杂质对照品做对照进行检查。
若杂质是未知的，可以采用主成分自身对照法或峰面积归一化法进行检查。
例如倪冲、廖玉山等利用高效液相色谱法（HPLC）测定曲尼司特滴眼液中曲尼司特及其有关物质的含量[3]。
李旭仁、李霞等采用高效液相色谱法（HPLC）测定甲磺酸培氟沙星片含量及有关物质[4]。
刘向红、冷晓燕等采用高效液相色谱法（HPLC）测定苄达赖氨酸滴眼液的有关物质。
金鸽、李雪等采用高效液相色谱法（HPLC）测定苄达赖氨酸滴眼液的含量和有关物质[5]。
1.3 在含量测定中的应用
用高效液相色谱法测定含量可以消除药物中的杂质，制剂中的附加剂及共存的药物对测定的干扰。
中药材及其制剂组成复杂，基中不少有效成分的含量测定也越来越多地采用了高效液相色谱法。
赵龙、王增寿利用高效液相色谱法（HPLC）测定贝特令中维生素A的含量 [6].赵蕾钟淮滨利用高效液相色谱法（HPLC）测定安降片中葛根素的含量。
此外，高效液相色谱法（HPLC）在农药检测、中药材指纹图谱[14]以及药物代谢动力学等方面的研究也发挥着重要的作用。
[7]
2 应用前景——HPLC 及其联用技术在药物分析中的应用
近年来, HPLC 仪的组成部件: 输液泵、色谱柱、检测器都有新的发展, 尤其是检测器方面的发展,如二极管阵列检测器已普遍应用, 蒸发光散射检测器对无近紫外吸收的药物, 提供了一种有效的高灵敏度的方法。
随着各个部件的改进,
也出现了多种联用技术。
譬如, 有人曾用HPLC2示差折光检测法(RID) 分析了麦芽糖等7 种糖类及软饮料中果糖、葡萄糖、柠檬酸等成分[8]。
而RID 灵敏度较低, 受温度影响较大。
GAMES 等[ 9]曾用HPLC2热喷雾(TS)2质谱(MS) , 同时分离和测定了前列腺素D2 , beclomethasone diproinate , ranitididine2N2oxide 三个药物的相对分子质量。
小角度激光散射检测器(LALLSPD) 是近代HPLC 领域中出现的一种新型检测技术。
HPLC2LALLSPD 可以快速检测多糖、蛋白质类高聚物的相对分子质量及相对分子质量分布参数, 可不需要标准品或外标要求[10]。
在药物杂质检测中, HPLC2MS 测定和HPLC2核磁共振(NMR) 测定都是简便、快速的方法,但HPLC2NMR 联用技术中NMR 测定不受HPLC 分离过程中使用的缓冲盐溶液的限制, 并可以提供大量的结构信息。
杨春等[10]用HPLC2NMR 联用技术中的连续流动和停止流动两种模式对萘哌地尔中杂质进行检测, 根据HNRM, H2HCOSY谱完成了主要杂质12萘环2丙三醇结构鉴定。
HPLC2NMR 是解决合成药物中杂质结构确证的简便、快速方法。
杨凤仙等[11]应用HPLC2电喷雾(ESI)2MS法, 分析了水和土壤中有机磷酸化合物异丙基磷酸和异丙基磷酸丙酯。
采用了选择离子监测(SIR)技术, 排除了基质干扰, 回收率分别为100 %和90 %, 灵敏度1 ng·μL - 1 。
HPLC2MS 联用在体内药物代谢研究、临床药物检测和生物大分子测定有着广泛的用途。
微柱液相色谱的研究也十分活跃, 由于分析所需的样品量及流动相的消耗大大下降, 检测的灵敏度又大大提高, 使HPLC 分析更加灵敏准确、简便快速。
特别是联用技术的发展, 使之在药物分析生命科学领域的应用更具重要意义。
小结
综上所述, HPLC 具有专属性强、灵敏度高等特点, 既可用于分离也可用于定量分析, 适用于各种各样的有机化合物。
因此在药物成分的分离与测定方面能够充分发挥其它分析方法无与伦比的优势。
而且随着计算机软件的开发、专家系统的应用、检测手段的进步、各种联用技术的出现以及其他一些相关问题的解决, HPLC 在医药研究中将会发挥越来越重要的作用。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京：化学工业出版社，2010.
[2] 中国药典，1990，二部.
[3] 倪冲, 缪玉山2 陈国明, 王晨霞.高效液相色谱法测定曲尼司特滴眼液中曲
尼司特及其有关物质的含量[J] .东南大学学报( 医学版) ，2008, Sep; 27( 5) : 365-367.
[4] 李绪伦,李霞,曾杰,刘映倩.HPLC法测定甲磺酸培氟沙星片含量及有关物质[J] .儿科药学杂志, 2009,15(3):49-50.
[5] 刘向红、冷晓燕，许靖.高效液相色谱法（HPLC）测定苄达赖氨酸滴眼液的有关物质[J] .石油化工应用,2008,27(2):65-67.
[6] 金鸽,李雪,王晓明,方成玲,金描真.高效液相色谱法测定苄达赖氨酸滴眼液的含量和有关物质[J] .安徽医药，2010（1）:41-42.
[7] 高珣陈晓辉韩木南毕开顺.高效液相色谱法测定肌肽滴眼液中L- 肌肽的含量及有关物质[J] .现代生物医学进展，2009(9） :2345-2346.
[8] 颜素华，李健和，曹俊华.高效液相色谱法测定法莫替丁注射液中的有关物质和含量[J] .中国现代医学杂志，2010，20（11）:1661-1668.
[9] 赵龙,王增寿.利用高效液相色谱法测定贝特令中维生素A的含量[J] .药品检测,2001 10（10） :41.
[10] 赵蕾,钟淮滨.高效液相色谱法测定安降片中葛根素的含量[J] .基层中药杂志,2001，16（4）:23-24.
[11] 梁丽梅,庞小雄.利用高效液相色谱法（HPLC）测定安神补脑液中维生素B1 的含量[J] .广东医药学报, 2006,22（2）:148-149，173.。