胚胎移植和人工受精
一、胚胎移植又称受精卵移植:俗称人工授胎或借腹怀胎。
它是将家畜的受精卵或发育数日的胚胎,从某一个体(供体)移植到同种动物的另一个体(受体),使之继续发育的技术。
经胚胎移植产生的后代从受体得到营养发育成新个体,但其遗传物质则来自它的真正亲代,即供体动物和与之交配的公畜。
二、胚胎移植的关键技术:在国际上首次对体细胞克隆牛进行了超排处理,获得平均每头次可用胚胎6.5枚;应用玻璃化冷冻保存技术对体细胞克隆牛超排胚胎进行了冷冻保存、移植,并获得了健康的犊牛;研究了玻璃化冷冻对体内外生产牛胚胎细胞的损伤,提高了半胚裸露冷冻的保存效果,简化了冷冻解冻程序,冷冻裸露半胚移植妊娠率达到了47.1%。
其胚胎移植的主要技术环节:
(一)供体母牛和受体母牛的选择;
(二)供体母牛和受体母牛的同期发情;
(三)供体母牛的超数排卵;
(四)胚胎的采集和质量检查;
(五)胚胎冷冻保存;
(六)胚胎移植;
(七)受体母牛移植后的妊娠检查。
三、胚胎移植技术在畜牧业发展中的重大意义:
利用胚胎移植,可以开发遗传特性优良的母畜繁殖潜力,较快地扩大优秀种公牛和核心母牛的数量。
采用胚胎移植则使优良母畜免去了冗长的妊娠期,胚胎取出后不久即可再次发情、配种和受精,从而能在一定时间内产生较多的后代。
如果向母畜注射促性腺激素,还可诱发其在一个发情期中排出比自然情况下更多的卵子,取得多个胚胎供移植之用。
尽管单个胚胎的生产成本较高,但由于种公牛和种母牛较高的经济价值和社会价值,以及利用胚胎移植在育种方面可以获得同胞或同卵双生牛进行后裔测定等优势,因此,该技术在种公牛的选育和优质核心母牛群的培育以及加快育种步伐方面均具有极大的优越性。
另外,由
于胚胎可长期保存和远途运输,还为家畜基因库的建立,品种资源的引进和交换,以及减少疾病传播等提供了更好的条件。
四、胚胎移植技术的主要用途:
牛胚胎移植技术可快速扩繁良种肉牛品种优秀母牛的后代数量,使良种母牛的繁殖效率提高了10倍左右,是继良种公牛人工授精技术之后,牛繁殖技术领域的第二次革命。
因此,在养牛业生产与研究中,有以下主要用途:
(一)快速扩繁引进良种母牛优秀个体的数量。
(二)缩短良种牛选择种畜的年限,加速品种改良。
(三)通过移植两枚胚胎或分割后的两枚半胎,或者在配种后6-7天再移植一枚胚胎,提高肉牛的双胎率。
(四)通过引进良种肉牛品种的胚胎,代替活畜进口。
(五)应用胚胎冷冻技术,建立基因库,保存具有优良遗传特征的良种牛品种。
(六)利用难孕或不孕的母牛繁育后代。
人工授精
一、牛的人工授精是有人工和器械的方法,采出公牛的精液,经过添加必要的药品和营养物质,扩大稀释倍数,再用器械将精液输送到母牛的子宫颈深部,使精子和卵子相结合,以达到妊娠目的的一项繁殖技术。
分鲜精配种和冷精配种。
可以有效提高优良种公牛的利用率,节省种畜饲养费用。
二、牛的人工授精技术分:工艺(引进良种公牛→采精→制成颗粒冻精→利用液氮在零下196℃的条件下保存)和人工授精操作流程(准备工作→保定母牛作发情鉴定→器械消毒→利用2.9%柠檬酸钠液解冻精液→镜检活力达0.35以上→对发情适期母牛输精)两个部分。
(一)精液的解冻:冷冻精液使用前必须使用解冻液解冻,方能进行人工授精。
1.解冻液配制:解冻液一般使用2.9%的柠檬酸钠溶液和维生素B12(2毫升1支)。
解冻液配制必须准确,浓度不可偏高偏低,pH为6,宜现配现用,也可用安瓶分装备用。
维生素B12注意避光保存,防止购进伪劣产品,解冻时防止生水滴入。
2.解冻方法:解冻时先把解冻液倒入小玻璃瓶内,每输精1头母牛用解冻液1.5~2毫升,把装好解冻液的玻璃瓶(安瓶)放在40℃的温水中预热,再将颗粒冻精2粒迅速投入小玻璃瓶中,并不断地轻轻摇动,待颗粒精液快融化完时立即将小璃玻瓶在温水中取出,继续摇动使其全部融化,再进行镜检,观察活力,如活力不低于35%,便可用来输精。
解冻后的精液存放时间不超过1小时。
(二)精力活力的检查方法:取一点精液,滴在载玻片上,加上洁净的盖玻片,使载玻片和盖玻片之间充满精液,避免空气泡藏在里面,然后放在显微镜下放大400倍,观察精液中前进运动的精子数量,来评定精子活力的等级。
评定时一般分为十级:在显微镜下100%的精子都是直线前进运动的可以评1.0级,90%直线前进运动的0.9级,其余依次类推。
颗粒冻精解冻后活力达0.35以上方可用。
精子活力检查时,必须在37~38℃的环境中进行,冬季必须使用保温箱,温度保持38~40℃,才能使检查获得准确的结果。
(三)发情鉴定:母牛的发情鉴定方法,常用的有以下几种:
1.外部观察法:主要是根据母牛的外部和精神状态来判断发情的状况。
母牛发情时,表现兴奋不安、鸣叫、游走、啃草减少,尾根举起,频频排尿,追逐和爬跨其他母牛并接受其他母牛爬跨,母水牛发情特征不如黄牛强烈明显,表现不规律,虽然也比平时兴奋、敏感和不安,但不鸣叫,有时发出“屹屹”叫声,在夜间,也不太爬跨其他母牛,在栏内常站在一角,注意外界动静,放牧时常抬头张望,不太爱吃草。
检查发情母牛的外阴部,可见外阴唇水肿,柔软而松驰,原有细小皱纹消失,黏膜红润,阴门口多开,并出现阴道腔,在尾上端阴门附近可看到黏液的分泌物的结块,或有透明黏液自阴门流出。
2.阴道检查法:用阴道开张器观察阴道的黏膜、分泌物和子宫颈口的变化来判断母牛的发情状况。
不发情的母牛阴道黏膜苍白、干燥、子宫颈外口关闭干燥、紧缩成菊花。
若母牛的阴道内有黏液,阴道黏膜光亮、充血、红润、子宫颈外口出现凸、开、红、湿润便是发情。
发情开始时,阴唇、阴道及子宫颈外口等部位充血肿胀度轻微,黏膜颜色较淡,以后随着发情的进展和性欲旺盛,充血肿胀度更甚,颜色渐深,发情末尾时,充血肿胀度又随之减退,最后完全消失,恢复正常状态。
子宫颈外口的开张度,也随着发情的进展,由微开到开张,最后又逐渐缩小乃至关闭。
发情开始时,黏液量少,呈透明如水样,稀薄无牵缕性,黏性不强,至发情旺盛期,黏液量增多,颜色为透明或半透明时,牵缕性很强,呈玻璃棒状较稠,转入发情末期,黏液量又减少,颜色半透明,混浊或乳白色,黏性差成糊状。
3.直肠检查法:主要是检查卵巢的卵泡发育情况。
卵泡的发育随着母牛的发情变化分四个时期,即:弹泡期→软泡期(卵泡成熟、泡壁很薄、柔软、波动明显呈圆形或卵圆型)→软皮期。
具体操作:术者剪短指甲,用水润滑手,手臂插入直肠,尽掏宿粪,然后顺着直肠底部用指肚探摸全部卵巢,或按子宫颈、子宫体、子宫角、卵巢次序探摸。
找到卵巢用食、中指抓住卵巢系膜,并将该两指稍微弯曲,固定住卵巢,然后用母指探摸,必须做到小心、细致、轻,试探卵巢大小、形状、轻硬程度、表现凹凸及卵泡发育状况,用脑记忆,并进行登记。
母牛发情后,有卵泡发育的,最好每隔12小时检查1次。
三、牛人工授精技术在畜牧业发展中的意义:牛人工授精是充分利用良种公牛、加快良种繁育的重要途径,在自然交配下,一头公畜一年配种母畜的数量一般只有20─40头,而利用人工授精,牛可配种数千乃至数万头。
这样就可利用少量优良公牛繁殖大量的优良后代。
由于人工授精技术的应用,饲养的种公牛可大大减少,牧场甚至可不养种公牛,而代以购买精液为母牛配种,从而节省了种畜的饲养管理费用。
精液可以保存和运输的特点,还为打破配种的时间、地域限制创造了条件。
我区胚胎移植技术研究和推广在国内起步较早,牛人工授精技术已在全疆普遍开展。
上世
纪八十年代以来,畜科院即组织课题组对牛胚胎移植关键技术进行研究并取得重大突破,整合集成了胚胎移植各项成熟技术,指导组建了年产万枚优质高产奶牛胚胎的工厂化生产基地,形成了供体牛基地、胚胎生产、移植、技术培训等较完整的产业化服务体系,并将此技术推广至全疆45个县市,为全国20个省区销售胚胎和提供技术服务,在河北、河南及青海建立了胚胎移植分站。
目前,我区年产牛胚胎3万余枚,占我国牛胚胎产量的50%。
畜牧科学院开展的“牛胚胎移植技术及牛羊胚胎库的建立” 1991年获自治区科技进步一等奖;“牛羊胚胎移植技术的研究和应用” 1993年获国家科技进步二等奖。
我区胚胎移植技术的研究推广,有力促进了我国胚胎移植技术产业化的进程,使我国从1999年的4500枚(世界第14位)增加到2003年的61131(世界第4位、亚洲第一)。