前向角散射光（, ）
入射激光的前向散射光信号
细胞相对大小及其表面积
侧向角散射光（, ）
入射激光90 角的散射光信号
细胞粒度及细胞内相对复杂性
荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞 抗原结合越多，产生的荧光信号越强。
3
45示意图
4
抗原分布
• 表面,胞浆,核内
• 是共同检测还是分别检测?
表面
胞浆
核内
CD3, CD4, CD8, tetramer
10
细胞类型鉴定
(1993) 100:534-40.
11
(1993) 667:265-280
45示意图
正常骨髓细胞
血液肿瘤细胞
老化粒细胞 、噬酸细胞
早幼—成熟粒细胞
单核细胞 M5
M3、 M4、
淋巴细胞
、、
正常前体细胞 嗜碱性粒细胞
M2、
M0、M1、 M4、M5、
成熟红细胞、血小板
M6、M7、
细胞碎片
CD7+ and/orCD2+
Myeloid Lineage
T-Lineage
CD19+
B-Lineage
Myeloid, no or minimal
maturation
CD34+/CD117+/-
HLADR+
CD56+
CD15-/+ CD11b-, CD14-
Promyeloid
CD15+/CD117+/-
30
31
流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势
1、纤维化、硬化的骨髓可能没有足够的细胞分析。 2、细胞太多聚集或成团也可能没有足够的分析细
胞。 3、硬化的组织也很难得到足够的分析细胞。 4、组织结构关系、形态关系丢失。 5、比例太低的单克隆B细胞很难检测到。
32
流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势
6、没有异常免疫表型的T细胞淋巴瘤也可能很难检测。 7、异常的T细胞免疫表型不一定提示T细胞肿瘤，也可能
D14-
Myelomonocytic & Monocytic
CD14+ CD4+/HLADR+ CD15+ CD11b+
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如71、、41、61
22
3 23
4
24
4
25
初治急淋分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
29
多发性骨髓瘤（）
多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生性疾病。正 常浆细胞为3845，使用 3845双标记检测外周 血和骨髓标本，可以准确划定浆细胞群。通常 使用38和45，结合轻链检查，对多发性骨髓瘤 细胞进行分析。另外，正常浆细胞的表面标记 为1956-，而多发性骨髓瘤细胞通常为1956+。 138目前认为是浆细胞最特异的指标。这样， 使用流式细胞仪对外周血或骨髓标本进行多参 数分析，并计算异常浆细胞含量，对于多发性 骨髓瘤的诊断和治疗评估具有重要意义。
19
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
20
白血病免疫分型
• 根据白血病细胞表达的系列相关抗原， 确定其系列来源。如：淋系、粒单系、 红系、巨核系等。
• 根据白血病细胞表达的系列分化其相关 抗原进一步分型。如：早前B，前B，普 通B…
21
初治急白分型
– >20%
CD13+ and/orCD117+ and/orCD33+
非血液来源1细2 胞
B淋巴细胞分化与抗原表达关系图
(2006) ’s
13
T淋巴细胞分化与抗原表达关系图
(2006) ’s
14
粒细胞分化与抗原表达关系图
(2006) ’s
15
单核细胞分化与抗原表达关系图
(2006) ’s
16
非肿瘤T淋巴 细胞表型
17
非肿瘤B淋巴 细胞表型
18
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
CD7+ and/or CD2+
CD19+
T-Lineage
B-Lineage
2 5 348-
2+
2+
5+
5+
48+
4+ 8+
3-
3+
B
10+
10-
10+
10
26
27
28
白血病免疫分型的价值
确定的细胞类型（B细胞或T细胞）和 的分化阶段。 鉴定的特征。 对形态学上未分化的急性白血病有助于鉴 定细胞类型。 诊断一些少见类型的白血病。如：M6、M7、 M0等。
cytokines
DNA
3,4,8, +
3,4,8, +
+
3,4,8, +
+
5
设门
6
08-03307
设门
全部 细胞
门内细胞
7
08-03307
8
血液肿瘤分类进程
9
白血病免疫分型的理论基础
白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标 志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶 段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细胞，但 仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而 仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤 进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴 瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗原的 表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细 胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/淋巴 瘤细胞的存在。
是感染引起的单核细胞增多症、反应性皮肤病、炎症性 疾病。 8、取材不好或样品保存不当，可能导致假阴性的结果。 9、的肿瘤细胞水平低，所以免疫表型检测或诊断不可靠。 10、治疗或复发可能引起肿瘤细胞表面抗原改变。
33
谢谢！
白血病淋巴瘤免疫分型
流式细胞术的基本概念
流式细胞术（ , 简称）是一种可以快速、准确、 客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的 多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人 工合成微球等
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并 加以定量
2
散射光信号和荧光信号