关于厌氧菌培养方法的探讨
啤酒有害菌是纯生啤酒生产中微生物检验最重要的一项指标，如何对啤酒进行有效的厌氧菌(即有害菌)检测意义重大。

影响厌氧菌检验的因素很多，其中最重要的是能否达到厌氧菌培养所需的厌氧环境。

本文结合作者多年的工作经验，对厌氧培养箱法培养厌氧菌进行初步探讨
1 常见的厌氧菌培养方法
1．1 最古老的方法：蜡烛耗氧法此法利用蜡烛燃烧消耗封闭容器里的氧气，产生二氧化碳，在封闭容器内形成厌氧环境。

此法产生的厌氧环境很难得到保证，培养过程不方便操作。

1．2 置换法
通过真空泵使二氧化碳气体从厌氧罐底部进入，二氧化碳比重比氧气大，迫使氧气上浮，随着二氧化碳气体的逐渐充满氧气从顶部排出，在厌氧罐里形成厌氧环境。

使用此方法，成本较低+佩操作繁琐，厌氧程度不能得到有效保证。

1．3 厌氧盒，罐法
厌氧盒，罐法是利用吸氧剂把厌氧盒，罐中的氧气吸收，使其达到无氧状态。

由于厌氧盒容量一般较小，此法厌氧环境能够保证，但不能满足大生产需要；另吸氧剂成本较高。

1．4 厌氧培养箱法
通过真空泵先将箱内氧气抽出，充人氮气和混合气，使箱内形成厌氧环境。

此厌氧环境在正静隋况下可一直保持。

每次使用时只需置换过渡间的空气，实现与培养箱内的互通，进行样品的放置或取出等操作。

2 厌氧培养箱法简单介绍
2．1 初始厌氧环境的形成
为了严格保证厌氧环境，一般采取20次抽真空和充N2过程进行初始化。

2．2 样品放置的步骤
在样品放置过程中．可以采用三次抽真空，两次N2清洗交替进行，使厌氧培养箱内的氧气含量低于l％。

在厌氧菌培养过程中，适当保持培养箱内的厌氧气体压力，使形成轻微正压，以保证厌氧环境。

2．3 使用要点
由于厌氧培养所需的时间比较长，一个厌氧培养箱内又不可能只培养一个时期的样品，这就牵涉到不同时期样品的进出。

在放、取样品进厌氧培养箱时，都要先通过过渡间，只有过渡问的外门开启接触到外界空气，在样品进入过渡间后．经过平衡清洗程序使厌氧环境得到控制，而培养箱中存有的少量氧气可通过催化剂吸收。

通过厌氧指示剂来检查厌氧培养箱内是否达到厌氧程度如果指示剂呈白色则表明达到厌氧程度，厌氧程度不足时，指示剂呈红色。

当出现指示剂呈红色状态时，可按照以下步骤对厌氧培养箱进行检查：氮气和混合气的瓶内压力或输出压力是否符合要求，如果不符合，要及时调整气罐上的气阔，把进气阀调到正常的进气状态；同时，要检查连接气瓶的管道与厌氧培养箱的接口密封是否完好，以上两项都符合要求时，就要检查厌氧培养箱内两道封闭门是否关好，压力释放瓶中石蜡液位和石蜡油的颜色是否正常，当石蜡油的颜色由无色透明变成黄色时，就要更换石蜡油。

另外，在日常维护时，还要注意培养箱能否进行自动补气程序，视窗、套筒、套筒口和护套是否完好无裂缝。

同时还要经常检查箱内的温度是否达到要求。

培养箱内的催化剂和干燥剂要按频率进行再生，以保持箱内环境的干燥和厌氧环境等。

3 结论
厌氧培养箱法虽然初始操作较繁琐，但每次操作时简便，可随时进行样品的放置、取出、观察；箱体容量大，能制造较大的厌氧空间，满足大生产需要；厌氧程度较高，样品能立即进入厌氧环境，使结果更准确可靠。

此设备体积较大，占地多，一次性投资大，但消耗费用较低。

目前这种厌氧培养箱只有一小部分能进行自动温度控制，其余存放样品的空间温控要靠室温调节，这是有待改进的地方。

经过多年的实践，我们发现厌养培养箱法技术成熟可靠，是大企业啤酒有害菌检测比较理想的方法。