I.国内外食源性致病微生物检测新技术研 究与应用进展
食源性致病微生物是指以食物为载体， 导致人类发生 疾病的一大类微生物（古菌、细菌、真菌、病毒等）。近年 来，全球食品安全事件频频发生， 如美国的“李斯特氏杆 菌事件”、日本的“大肠杆菌0l57流行事件”等，对人类健 康带来很大危害，引起各国政府的全力关注。 传统的检测方法(如分离培养、生化鉴定等)无法对难培 养或不可培养的致病微生物进行检测， 而且特异性不高、 灵敏度低、操作烦琐耗时，不能实现有效的监测、预防作用。 因此，发展新的快速检测与鉴定食源性致病微生物的方 法是及时有效地控制和预防致病微生物传播的前提。
2. 免疫磁性分离技术ຫໍສະໝຸດ 3. 免疫胶体金技术
原理与特点：免疫胶体金技术 起源于1971年Faulk等应用电 镜免疫胶体金染色法(IGS)观察 沙门菌。其基本原理是以微孔 滤膜为载体包被已知抗原或抗 体，加入待检标本后，经滤膜 的毛细管作用或渗滤作用使标 本中的抗原或抗体与膜上包被 的抗体或抗原结合， 再用胶体 金结合物标记而达到检测目的。 其特点是单份测定、简单快速、 特异敏感，几分钟就可用肉眼 观察到颜色鲜明的实验结果， 并可保存实验结果。
国内外食源性致病微生物检测新技术
免疫学检测技术 聚合酶链反应(PCR)等技术
生物芯片技术
代谢学技术 其它技术
一 免疫学检测技术
免疫学检测技术将抗原-抗体反应的特异性与标 记技术(荧光素、放射性同位素和酶)的相结合， 是 一种可以定位、定性和定量的综合技术，具高专一性 和高敏感度。
近年来，该项技术在食品安全性检测中正逐步得以推广应用，如微 生物污染、天然毒性物、人兽共患疾病病原体检测等方面的检测分析。 微生物污染：Kryinskiand Heimsch等(1977)首次将ELISA用于食品 沙门氏菌(Salmonella spp．)的检测，并在应用中不断得以发展。目前 有许多种方法，其中通过制备单克隆抗体分析食品中细菌的ELISA技术 研究最多，检测结果准确可靠。例如对沙门氏菌最低检测量可达 500CFU／g，仅需22h， 比常规方法缩短了3～4d，与金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌无交叉反应。此外以ELISA技术为基础的全自动沙门氏菌 检测系统，实现了整个过程的自动化，全程耗时仅为45min。 毒素检测：真菌毒素(mycotoxin)是真菌产生的次级代谢产物，其 中的十几种对人类危害较大，它们一般同时具有毒性强和污染频率高的 特点。其中毒性最大、致癌能力最强的是黄曲霉毒素(AFT)。它在自然 界中分布十分广泛，黄曲霉常常和其他多种微生物在一起，生长在粮食、 油料作物的种子、各种食品和饲料中。自1977年抗黄曲霉素B1的单克 隆问世，至今，几乎所有重要真菌毒素(如伏马毒素、赭曲毒素、玉米 赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯酮、展青霉素等)的ELISA检测方法均已 建立。
4.酶联免疫吸附检测(ELISA)

原理：1971年Engvall建立了ELISA方法，它以酶或者辅酶 作为标记物，标记抗原或者抗体， 用酶促反应的放大作用来 显示初级免疫学反应，并且利用聚苯乙烯微量反应板(或球) 吸附抗原或者抗体，使其固相化， 在其中进行免疫反应和酶 促反应。根据酶反应底物显色的深浅进行定性或定量分析。
免疫荧光技术 免疫磁性分离技术 免疫胶体金技术
酶联免疫吸附检测(ELISA)
酶联荧光免疫分析技术(VIDAS)
1. 免疫荧光技术
原理与特点：免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体 活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上，与其相应 的抗原(或抗体)结合后，在荧光显微镜下呈现一种 特异性荧光反应。此技术的主要特点有特异性强、 敏感性高、速度快。 应用：此技术可用来对沙门氏菌、李斯特菌、葡萄 球菌毒素、E· ColiO157和单核细胞增生李斯特氏菌 等进行快速检测。王军等建立了养殖大黄鱼病原溶 藻弧菌的荧光抗体免疫快速检测技术。
特点：由于酶的催化效率很高， 间接地放大了免疫反应的结 果，使测定具有极高的灵敏度。 ELISA具有选择性好、结果 判断客观准确、实用性强、检测速度快、样品处理量大、以 及费用低等优点，弥补了经典化学分析方法和其他仪器测试 手段的不足。

应用：ELISA技术自二十世纪70年代出现开始，在临 床和生物疾病诊断与控制等领域中倍受重视。特别是 随着蛋白质分离纯化技术和基因工程技术的不断发展， 各种高纯度抗体、抗原和抗体复合物得以制备，单克 隆抗体技术的应用，使得该诊断检测技术在特异性、 灵敏度和客观性方面都有了大幅度的提高，并且在自 动化免疫技术的推进之下进一步具有了精确的定量分 析能力。由于ELISA的技术条件要求低、适用范围宽、 携带方便、且易商品化、操作简便和经济实惠，它已 成为一种应用最为广泛和发展最为成熟的生物检测与 分析技术，常以试剂盒的形式出现 。



原理与特点：免疫磁性分离技术是将特异性抗体偶联在磁 性颗粒表面，与样品中被检致病菌发生特异性的结合，载 有致病菌的磁性颗粒在外加磁场的作用下， 向磁极方向 聚集，弃去检样混合液，使致病菌不断得到分离、浓缩。 免疫磁性分离技术代替了常规的选择性增菌培养过程，可 特异有效地将目的微生物从样品中快速的分离出来。 应用：Skjerve等报道了采用免疫磁性分离技术， 从乳及 乳制品、肉类和蔬菜中分离沙门氏菌，其检测灵敏度为 100CFU／g。在英国，此法主要应用于牛奶中大肠杆菌 O157：H7的监测和食品中单核细胞增生李斯特氏菌、副 溶血性弧菌、小肠结肠耶尔森氏菌)等的检测。在实际应 用中，还可以与直接镜检技术、阳抗技术、酶联免疫试验、 PCR等技术相结合应用。此外， 以免疫磁性分离技术为 基础的免疫胶体金技术已成功应用于O l群霍乱弧菌的检 测。
完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：(1)包被抗原或 抗体的固相载体(免疫吸附剂)；(2)酶标记的抗原或抗 体；(3)酶的底物：(4)阴性和阳性对照品(定性测定)， 参考标准品和控制血清(定量测定)；(5)结合物及标本 的稀释液；(6)洗涤液；(7)酶反应终止液。结合物为 酶标记的抗体(或抗原)，是ELISA中最关键的试剂。 良好的结合物既保持了酶的催化活性，也保持了抗体 (或抗原)的免疫活性。在ELISA中，常用的酶为辣根 过氧化物酶(Horseradish peroxidase，HRP)和碱性 磷酸酶(Alkalinephosphatase，AP) 。国产ELISA试 剂一般都用HRP制各结合物。国外很多ELISA试剂采 用碱性磷酸酶(AP)作为标记酶。