Protein Biosynthesis Melanosome Tyrosinase Melanin
Proliferation Differentiation Melanin Synthesis Dendritogenesis
[BH4 ] Tyrosine
Melanocyte
158281 SymWhite® 377
158281 SymWhite® 377
体外美白效果 – 3
皮肤模型
为了证实SymWhite377的美白效果不是由于细胞毒性引起的，在 MelanoDermTM 皮肤模型 ( IV类皮肤)培养过程中（0.1%的 SymWhite377），第7天和第14天分别测定 MTT指标。
结果表明
=> 细胞仍然表现为100 % 活性
OH O HO H OH
HO O
OH R O OH
O
功效差 /极其昂贵 浓缩品
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HO OMe
HO
OH
O
158281 SymWhite® 377
新型美白剂的筛选 蘑菇酪氨酸酶抑制剂
磷酸盐缓冲液 (pH 6.8) + 蘑菇酪氨酸酶 +测试 物(梯度浓度) 小孔板培养
Pinus sylvestris
HO HO
unstable
银松素
Hydrogenation
OH OH
stable, but difficult to synthesize
二氢银松素
IC50 rel. to Kojic Acid: 1
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IC50 rel. to Kojic Acid: 10
ET-1 a-MSH, ACTH
PGE2
SCF bFGF GM-CSF
PLC PKC
MCR-1
MAP Kinase DNA Damage Cell Nucleus
Plasma Membrane
Adenylate Cyclase
cAMP
PKA
DNA Transcription Phenylalanine Phe-Hydroxylase
LCR values
600 400 200 0 72 226 1
SymWhite® 377
曲酸
ß-雄果苷
氢醌
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体外美白效果 – 3
皮肤模型
IV类皮肤
MelanoDermTM MEL-300-B 模型 (IV类皮肤)
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市售美白剂的概况
化合物 曲酸 氢醌
HO
结构
O HO O
HO
缺点
OH
光敏、肝毒性、甲状腺副 作用 细胞毒性 氢醌的前体, 极其昂贵 效果差, 不稳定 功效差,刺激性
OH
OH
雄果苷 维生素C α-羟酸（果酸） 甘草
O
HO HO
O O OH OH
<0.003
<0.003
<0.001
Kojic Acid
(benchmark)
α-雄果苷
二氢银松素 4-苄基-1,3-苯二醇 β-雄果苷 氢醌
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银松素 2-(1-苯乙基)1,3-苯二醇
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体外 美白效果 – 2
Day 0 Day 4
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In vitro EFFICACY – 4
HAIR LIGHTENING
Melanin staining rel. to vehicle [%] Melanin staining rel. to vehicle [%]
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体外 功效– 1
对蘑菇酪氨酸酶抑制作用
IC50 test compound
]
25
Efficacy rel. to Kojic Acid [ IC50 Kojic Acid
22.1
SymWhite® 377
20
15 10.26 10
5 1 0
1.94
1.06
0.04
模拟外用试验样品
培养 (37°C, 7 和19 天) 每天使用两次
顶视
萃取细胞黑色素
在苏伦液中培养 soluene (60°C, 30 分钟)
光定量测定黑色素 (400 nm)
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体外美白效果 – 3
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In vitro EFFICACY – 4
HAIR LIGHTENING
> Human hair follicles (hHF) from face-lift surgery > 12 microdisected hHF per test sample > Cultured for 4 days w/o SymWhite® 377 > Melanin detection by Fontana Masson staining > Melanin quantification via image analysis software
HO
HOzenediol
4-(1-Phenylethyl)1,3-benzenediol (SymWhite® 377)
IC50 rel. to Kojic Acid: 2
IC50 rel. to Kojic Acid: 22
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• 氢醌的美白效果是细胞毒性产生的 • 另外3种成分, 包括 SymWhite® 377是安全的
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体外美白效果 – 2
B16V 黑素瘤细胞
LCR (Lightening Act. vs. Cytotox. Ratio) =
Melanosome
Melanin
Tyrosinase
Tyrosine
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黑色素的生成机制
UV light
Keratinocyte
ACTH a-MSH bFGF cAMP ET-1 GM-SCF MCR-1 PGE2 PKA PKC PLC SCF Adrenocorticotrophic hormone a-Melanocyte Stimulating Hormone basic Fibroblast Growth Factor cyclic Adenosine Monophosphate Endothelin-1 Granulocyte-macrophage stimulating colony factor Melanocortin Receptor-1 Prostaglandin E2 Protein Kinase A Protein Kinase C Phospholipase C Stem Cell Factor (alias Steel factor)
培养 (37°C, 10 min)
加入 L-多巴
光定量测定黑色素 (475 nm)
测定IC50*
*测得的抑制率下降50%所用的测试物的浓度 158281 SymWhite® 377
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新型美白剂的筛选 树木中发现的天然酪氨酸酶抑制剂
HO
B16V 黑素瘤细胞
96孔板上接种B16V黑色素瘤细胞
粘附
加入试验物，再加入 10 nM α-MSH
培养 (37°C, 96 h)
美白剂
碱萃取细胞黑色素
培养 (RT, 3 h)
光定量测定黑色素(400 nm)
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体外美白效果 – 2
B16V 黑素瘤细胞
LCR: 美白活性 vs. 细胞毒性比率IC50 (细胞毒性): 50%细胞有活性/50%细胞无活性的活性物浓度IC50 ( 美白活性): 酪氨酸酶活性抑制50%所用的测试物浓度
LCR =
IC50 (细胞毒性, B16V) IC50 (美白效果）
IC50 (细胞毒性)
化合物
SymWhite® 377
[µM]
IC50 (美白效果） [µM]
LCR
150 10000 10000 32
2.1 441 67 31
72 226 1492 1
曲酸 ß-雄果苷 氢醌
在远低于细胞毒性的浓度 下实现美白效果是最令人 满意。否则，对酶的抑制 会引起细胞毒性.。因此, LCR值越大产品越安全。 LCR >10 的产品被视为安 全的产品。
皮肤模型
每天使用试验物、连续使用19天后的结果
1.0% 1.0%
0.1%
PBS
曲酸
黑色素 减少
80 %
0.1%
2% 0.01%
0% PBS