（二）临床症状 三、致病性：
A、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。
四、微生物学检验
（一）检验步骤 检样→样品处理→增菌培养→SS、 HE平板分离培养→初步生化鉴定→最 后血清学鉴定→报告
1、增菌培养
培养基：GN增菌液 培养条件：36±1℃ 6—8h 当培养液出现轻微混浊即中止培养。 操作： 称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液 的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以 8000～10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌 砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其 乳化，于36℃培养6～8h。培养时间视细菌生 长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中 止培养。
4、血清学试验和生化鉴定试验 4、血清学分型：
• 凡凝为志贺氏菌，挑取三糖铁琼脂上的培养 物，做玻片凝集试验。 • 先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K 抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后 再检查； • 如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D 群血清分别试验。 • 4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍 氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1～15 各型因子血清检查。 • 如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏 菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。
麦康凯琼脂平板
EMB平板照片及原理
3、初步生化试验： • 挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄 糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏， 经36℃培养18～24h，分别观察结果。 • 原理：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观 察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该 培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1， 只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使 斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触 空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质， 生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于 是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄 色。
（2）进一步的生化试验
5、进一步的生化试验： 葡萄糖铵 西蒙氏柠檬酸盐 赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶 pH7.2的尿素 KCN生长 水杨苷和七叶苷的分解 -
已判定为志贺氏菌属 五项生化试验： 5%乳糖发酵 甘露醇 棉子糖 甘油发酵 靛基质试验
（3）生化分群
6、结果报告：
• 综合生化血清学试验结果判定菌群， 菌型，并做出报告。
志贺氏菌生长的结果（现象）： （1）斜面产碱仍为红色或粉红色； （2）底层产酸不产气，变黄色； （3）不产H2S，不出现黑色。 志贺氏菌在半固体培养基生长： 沿线生长，无动力。
下述培养物可以弃去：
a. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物； b. 在18～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物； c. 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培物； d. 产气的培养物； e. 有动力的培养物； f. 产生硫化氢的培养物。 凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏 志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株， 可做血清学分型和进一步的生化试验。
二）其他检测方法
• • • • 脉冲场凝胶电泳 荧光菌球法 协同凝集试验 PCR法
三）检验操作要点
• 志贺氏菌在常温中生存的时间较短，应尽快 进行试验。 • 如24h内不能检验，样品应在冰箱内 • 长时间不能检验，放在低（TSI）琼脂试验的原理
2－志贺氏菌 3－沙门氏菌
4－大肠杆菌 Organism Test Result
1. Pseudomonas aeruginosa（铜绿假 单胞菌）：Motile 2. Staphylococcus aureus：Non-motile 3. Bacillus subtilis：Motile
发酵乳糖的某种肠杆菌
HE平板原理及反应
不发酵乳糖的某种肠道菌， 而且产生硫化氢，可能是沙 门氏菌 不发酵乳糖的肠道菌，可 能就是志贺氏菌
SS平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar)
大肠杆菌或者别的发 酵乳糖的肠杆菌
是沙门氏菌。有黑色中 心。 如果没有黑色中心，就很 可能是志贺氏菌了
第十一章 食品中食品卫生微生物的测定
志贺氏菌及其检验 致泻大肠埃希氏菌及其检验
志贺氏菌及其检验
• 志贺氏菌
一、生物学特性 1、革兰氏阴性杆菌 2、无荚膜、无鞭毛、 无 芽孢，有菌毛 3、需氧或兼性厌氧 4、易于在普通培养基上 生长 5、四个亚群
革兰氏阴性鲍氏志贺菌
志贺氏菌的菌毛
二、污染途径 • 即可产生内毒素，也可产生外毒素，是侵 入性细菌 • 传染源：食物、病人、粪便、苍蝇等 主要污染凉拌菜
2、分离培养 • 强选择性平板：SS或HE • 弱选择性平板：麦康凯或伊红美蓝平板(EMB) 在工作中36±1℃培养 18—24h， • 菌落特征：无色透明，中等大小，光滑圆形菌 落
麦康凯琼脂和HE琼脂的区别
• 两者都选择性生长革兰氏阴性菌。 • MacConkey含胆盐及龙胆紫。加了乳糖和 中性红来辨别乳糖发酵菌，如果可发酵乳 糖，菌落为粉红色，不发酵为透明。 • Hektoen enteric 除乳糖发酵外，还可以区 分硫化氢。主要用来区分两类细菌：沙门 和变形杆菌不发酵乳糖，产硫化氢，黑色 克隆；志贺和鼠疫杆菌不发酵乳糖，不产 硫化氢，克隆透明。