YM 云南省微生物研究所
中国微生物菌种保藏管理委员会组织机构
中国微生物菌种保藏管理委员会办事处(CCCCM): 中国科学院微生物研究所内,北京(AS),100080
1. 普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC) 中国科学院微生物研究所,北京(AS),100080:真菌、细菌 中国科学院武汉病毒研究所,武汉(AS-IV),430071:病毒
名称
缩写
名称
中国农业微生物菌种保藏管
中国农业科学院土壤肥料研究
ACCC 理中心
ISF 所
SH
上海市农业科学院食用菌研 究所
CACC
抗菌素菌种保藏管理中心
IA
中国医学科学院抗菌素研究 所
SIA
四川抗菌素工业研究所
CCGM 普通微生物菌种保藏管理中 C心
AS
中国科学院微生物研究所
AS-IV 中国科学院武汉病毒研究所 CFCC 林业微生物菌种保藏管理中心
2.农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC) 中国农业科学院土壤肥料研究所,北京(ISF),100081
3.工业微生物菌种保藏管理中心(CICC) 轻工业部食品发酵工业科学研究所,北京(IFFI),100027
4.医学微生物菌种保藏管理中心(CMCC) 中国医学科学院皮肤病研究所,南京(ID),210042:真菌 中国药品生物制品检定所,北京(NICPBP),100050:细菌 中国医学科学院病毒研究所,北京(IV),100052:病毒
第九节 工业微生物菌种保藏技术
在生产发酵中，具有高产有重要经济价值 的某一期待代谢产物主能力的微生物菌种的保 存和长期保藏，对于一成功的工业发酵过程极 为重要。
一、理想的菌种保藏方法应具备 的条件
(1) 经长期保藏后菌种存活健在； (2) 保证高产突变株不改变表型和基因型，特别
是不改变初级代谢产物和次级代谢产物生产的 高产能力。 (3)菌种保藏的基本措施是低温、干燥、真空。
冷冻保藏种类
一、普通冷冻保藏技术(-20℃) 二、超低温冷冻保藏技术(-60一-80℃) 三、液氮冷冻保藏技术
普通冷冻保藏技术(-20℃)
将液体培养物或从琼脂斜面培养物收获的细胞分接 到试管或指管肉，然后贮藏于一冰箱的冷藏室中， 或于温度范围在-5～-20℃的普通冰箱(-20℃)中。 或者，将菌种培养在小的试管或培养瓶斜面上，待 生长适度后，将试管或瓶口用橡胶塞严格封好，同 上置于冰箱中保存。 用此方法可以维持若干微生物的活力1—2年。
对于一些比较重要的微生物菌株，则要尽可能 多的采用各种不同的手段进行保藏，以免因某种方 法的失败而导致菌种的丧失。
国际重要菌种保藏机构
缩写
名称
ATCC 美国标准菌种保藏所，美国马里兰州，罗克维尔市
CBS 真菌中心收藏所，荷兰，巴尔恩市
NCT 国立标准菌种保藏所，英国，伦敦 C
中国菌种保藏单位
缩写
一、微生物菌种保藏
基本要求：
在一定时间内使菌种不死、不变、不乱
基本方法：
生活态
培养基传代培养 斜面、平板 寄主传代培养
休眠态
冷冻 干燥
液氮、低温冰箱 沙土管、冷冻真空干燥
由于微生物的多样性，不同的微生物往往对不 同的保藏方法有不同的适应性，因此，在具体选择 保藏方法时必须对被保藏菌株的特性、保藏物的使 用特点及现有条件等进行综合考虑。
三、液氮冷冻保藏技术
(一)冷冻保护剂
在液氮冷冻保藏中，最常用的冷冻保护剂是 二甲亚砜和甘油，最终使用浓度一般为甘油 10％、二甲亚砜5％。所使用的甘油—般用高 压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。
(二)液氮冷冻保藏微生物菌种的步骤
1．待冷冻保藏菌种悬液的制备
(1)从生长斜面制备菌悬液：每一斜面加入5ml含 10％甘油的营养液体培养；用巴氏吸管吹吸斜面制 成孢子及菌体细胞悬液；0.5～lml分装玻璃安瓿或 液氮冷藏专用塑料瓶。
液体石蜡法 甘油管法 砂管保藏法 砂土管保藏法 滤纸片保藏法 冷冻干燥保藏法 液氮冷冻法
2.1 冷冻保藏
冷冻保藏为保藏微生物菌种的最简单而有效的 方法。 通过冷冻，使微生物代谢活动停止。一般而言， 冷冻温度愈低，效果愈好。为了获得满意的冷 冻结果，通常应在培养物中加入一定的冷冻保 护剂。冷冻保藏时温度要求在-20℃以下，同 时应认真掌握好冷冻速度和解冻速变。 冷冻深藏的缺点之一是培养物运输较困难。
5.抗菌素菌种保藏管理中心(CACC) 中国医学科学院抗菌素研究所,北京(IA),100050 四川抗菌素工业研究所,成都(SIA),610051:新抗菌素菌种 华北制药厂抗菌素研究所,石家庄(IANP),050015:生产用抗菌素菌种
6.兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC) 农业部兽医药品监察所,北京(CIVBP),100081
应注意的是经过一次解冻的菌株培养物不宜再 用来保藏。
保藏过程中应注意控制保藏温度，培养瓶或试 管应严格密封。
这一方法虽简便易行，但不适宜多数微生物的 长期保藏。
二、超低温冷冻保藏技术(-60一-80℃)
要求长期保藏的微生物菌种，一般都要求在-60℃以 下进行保藏。 在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般方法是：
1．离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞； 2．用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞； 3．加入等体积的20％甘油或10％二甲亚砜； 4．混匀后分装入冷冻指管或安瓿中，于-70℃超 低温冰箱中保藏。
如果待保藏菌种生长在斜面上，则可用含10％ 甘油的新配制液体培养基洗涤收获。超低温冰 箱的冷冻速度一般控制在1-2℃／min。若干细 菌和真菌菌种可通过此保藏方法保藏5年而活 力不受影响。
CAF
中国林业科学院菌种保藏管 理中心
CICC
工业微生物菌种保藏管理中心
IFFI
轻工业部食品发酵藏管理中心
ID
中国医学科学院皮肤病研究 所
NICPB
卫生部药品生物制品监察所
IV 中国医学科学院病毒研究所 CVCC 兽医微生物菌种保藏管理中心
CIVBP 中国兽医药品监察所
7.林业微生物菌种保藏管理中心(CFCC)
中国林业科学院,北京(CAF),100091
二、工业微生物菌种保藏技术
(1)超低温或在液氮中冷冻保藏； (2)冷冻干燥或真空干燥保藏； (3) 转接培养或斜面传代保藏； (4)土壤或陶瓷珠等载体于燥保藏。
菌种保藏方法
暂时保藏法
斜面传代法 穿刺法
长期保藏法