农杆菌菌株的培养及感受态细胞的制备挑取根癌农杆菌LBA4404单菌落于3ml的YEB液体培养基（链霉素100mg/ml），28℃振荡培养过夜取过夜培养菌液500μl接种于50mlYEB（链霉素100mg/ml）液体培养基中，28℃振荡培养至OD600为0.5 左右。
5000rpm离心5min，集菌。
加10ml0.15MNaCl悬浮细胞，5000rpm离心5min，加10ml预冷的20mMCaCl2悬浮细胞，冰浴，24小时内使用，或分装成每管200μl，液氮中速冻1min，置于-70℃保存备用。
植物表达载体向农杆菌感受态细胞的转化取200ml 感受态细胞，加入1μg构建好的质粒DNA加入到，混匀后，冰浴30min。
液氮中速冻2-3min，37℃水浴5min，接着冰浴3min。
加入1mlYEB培养基，28摄氏度慢速震荡培养4h。
5000rpm离心5min，弃上清，集菌。
加入0.1mlYEB培养基重新悬浮细胞，涂布于含有100mg/ml Kan和125mg/ml Sm的YEB 平板上，28℃培养阳性克隆的鉴定挑取平板上长出的单菌落，接种于含有100mg/ml Kan和125mg/ml Sm的YEB液体培养基中，28℃振荡培养过夜，小量提取质粒DNA，以质粒DNA为模板进行PCR扩增鉴定。
农杆菌菌液的制备挑取继代2d后的农杆菌单菌落，在加有相应抗生素的液体YEB培养基中，在28℃黑暗条件下震荡培养16-20h（OD600为0.6-0.8）将菌液置于离心管中，18-20℃，5000rpm离心5min收集菌体。
将收集到的菌体用2mlD-inf液体培养基悬浮进行洗涤，以去除残余的YEB培养基18-20℃，5000rpm离心10min收集菌体，将菌体用2mlD-inf液体培养基，加入1‰AS，备用（放1h）农杆菌感染玉米幼胚初生愈伤及共培养将加入到D-inf（含AS）的菌液稀释到OD600为0.3-0.5放置1h以上，将幼胚或愈伤用D-inf（不含AS）洗一次，再浸入菌液中，用手上下颠倒30s，并放置5min，观察幼胚无明显伤口时，取出，用无菌滤纸吸干，放到D-AS固体培养基上，25℃黑暗条件下共培养3d，同时设对照。
植物受体材料幼胚、愈伤组织的制备愈伤组织的准备：玉米授粉后10-13d，取玉米幼穗在超净台上剥去苞叶，取出幼胚，将幼胚盾片朝上，接种于D培养基上，每培养皿接20-40个幼胚，28℃培养2-3d后，即可诱导出愈伤组织。
幼胚的准备：剥去苞叶、丝及一些多余部分，用刀插入上部，放入70%的乙醇，进入超净台，30s，拿出，超净台上吹干约15-20min，剥去玉米粒的2/3的表面部分，剥幼胚。
玉米转化体的筛选、继代和植株再生恢复培养的阶段：将共培养3d后的幼胚在灭菌水（加1‰的cef）中洗3次，每次20min，然后用滤纸吸干，转入D-cef固体培养基上，25℃，暗处，恢复培养7d。
选择加压筛选阶段：分4次第一轮D培养基+cef（1‰）+PPT（5mg/ml）第二轮D培养基+cef（1‰）+PPT（10mg/ml）第三轮D培养基+cef（1‰）+PPT（10mg/ml）第四轮D培养基+cef（1‰）+PPT（10mg/ml）每轮间隔均为2周；其中AgNO3可加（1‰或0.5‰）可不加，或一次加而另一次不加；cef使用浓度250mg/L，存储液浓度为250mg/ml；PPT存储液浓度为10mg/ml。
筛选后的恢复阶段：D培养基+6-BA（5mg/L），其中2,4-D或Dicamba浓度稀释5倍，蔗糖30g/L（或蔗糖20g/L，葡萄糖10g/L），时间为2周，暗培养。
筛选后的诱导阶段：D培养基+6-BA（5mg/L），其中2,4-D或Dicamba浓度稀释5倍，蔗糖50g/L，不加葡萄糖+cef1ml/L，暗培养。
分化阶段：D培养基，但不加任何激素，蔗糖浓度30mg/L不加葡萄糖，+cef1ml/L，光照培养。
生根阶段：培养基及母液的配置D-培养基NaFeEDTA 10ml/LN6 macro 50ml/LB5 micro 10ml/LDi comba(2,4-D) 1ml/L(5ml/L)RTV 10ml/LCasamina acids(酪蛋白水解酶) 0.5g/LL-Prine 700mg/L肌醇100mg/LSucrose 20g/LPH 5.8N6大量元素组成成分终浓度(mg/l）20×（g/L）硝酸钾KN032830 56.6硫酸铵(NH4) 2SO4 463 9.26硫酸镁MgSO4·7H20 185 3.7磷酸二氢钾KH2PO4400 2.58氯化钙CaCl2·2H2O 166 3.32(或无水氯化钙CaCl2 2.58 )配2L时，称取6.64gCaCl2·2H2O溶于600-700ml蒸馏水中，称取其他成分溶于600-700ml 蒸馏水中，分别溶解后，再混合到一起，定容至2000mlB5微量元素组成成分终浓度(mg/l）100×（mg/500ml）MnSO4·H2O 10 378.93MnSO4·4H2O 10 500ZnSO4·7H2O 2.0 100H3BO4 3.0 150KI 0.75 37.5Na2MoO4·2H2O 0.25 12.5CoCl2·6H2O 0.025 1.25CuSO4·5H2O 0.025 1.25Fe盐组成成分终浓度(mg/l）100×（mg/500ml）Na2·EDTA 37.3 1.865FeSO4·7H2O 27.8 1.390Na2·EDTA用温水溶解，放于50℃水浴，后将FeSO4·7H2O加入，定容至500ml。
Dicomba(MW:221.0) 335.1mg/100ml=3.315mg/ml (15μm)μ用2,4-D母液200× 5ml/L（2μg/L）RTV（100 ×，500ml体系）组成成分终浓度(mg/l）100×（mg/500ml） mg/1000ml Chloride Acid （139.63）0.0977 4.885 9.770 （氯化胆碱）Riboflavin(VB2，376.4) 0.0489 2.445 4.890 （核黄素）D-Biotin （VH，244.3）0.10016 5.008 10.016 （生物素）Folic Acid 0.0485 2.425 4.890 （叶酸）（用氨水单独溶解，再加蒸馏水定容）Nicotinic Acid （123.11）0.1994 9.97 19.94 （烟酸）Thiamine HCl （VB1，337.3）0.47222 23.611 47.222Ca-pantothenate （476.53）0.1000 5.0 10.0 （D-泛酸钙）Pyridoxine HCl （VB6，205.6）0.1994 9.97 19.94 （盐酸吡哆辛）C-fane cobalamin （VB12，1355.39）0.000135 0.00675 0.0135P-Aminobenzoic acid (137.13) 0.0494 2.47 4.94 （对氨基苯甲酸）以上各种维生素除叶酸外均溶于水，叶酸需先用氨水单独溶解，再加蒸馏水。
YEB培养基酵母提取物1g/L蛋白胨10g/L蔗糖5g/LMgSO4·7H2O 0.5g/LPH 7.5YEP培养基酵母提取物10g /L胰蛋白胨10g/LNaCl 5g/PH 7.0LB培养基胰化蛋白胨10g/L酵母提取物5g/LNaCl 10g/L琼脂粉15g/LD-AS培养基NaFeEDTA 10ml/LN6 macro 50ml/LB5 micro 10ml/LDicomba(2,4-D) 1ml/LRTV 10ml/LCasamina acids(酪蛋白水解酶) 0.5g/LL-Prine 700mg/L肌醇100mg/LSucrose 20g/L葡萄糖10g/LPH 5.8琼脂粉8g/LAS(0.5M) 200μlAgNO31ml/LAS和AgNO3终浓度均为100μM，且在培养基灭菌后稍凉时加入混匀。
D-Cef培养基D-培养基+ 1ml/LAgNO3 + cef1ml/LD-Inf培养基N6 macro 50ml/LB5 micro 10ml/LRTV 10ml/LNaFeEDTA 10ml/LDicomba(2,4-D) 1ml/LCasamina acids(酪蛋白水解酶) 0.5g/LL-Prine 700mg/L肌醇100mg/L蔗糖68.5g/L葡萄糖36g/LPH 5.2菌液保存甘油占总体积的15%，120ml体系：60%甘油30ml，菌液90ml，液氮速冻后-70℃保存。
摇菌大肠杆菌：5mlLB培养基+50μl菌液+5μlKan，37℃，300rpm，12-16h农杆菌：5mlLB培养基+50μl菌液+5μlSm+5μlKan，28℃，330rpm，12-16h抗性：质粒3301 KanpBI121 Amp农杆菌SmpUC19 Amp筛选后的恢复阶段1L培养基的组分6-BA 1.67ml （母液3mg/ml）NaFeEDTA 10ml/LN6 macro 50ml/LB5 micro 10ml/LRTV 10ml/LDicomba(2,4-D) 1-2.5ml/LCasamina acids(酪蛋白水解酶) 0.5g/LL-Prine 700mg/L肌醇100mg/L蔗糖30g/LPH 5.8琼脂8g/LCef 1ml黑暗培养2周诱导阶段恢复培养基中蔗糖50g/L，其他不变分化阶段恢复培养基中不加2,4-D和6-BA，其他不变，光照培养生根阶段1/2MS培养基MS基本培养基成分分子量使用浓度(mg/L)大量元素20×（g/L）KNO3101.11 1900 38NH4NO380.04 1650 33KH2PO4 136.09 170 3.4 MgSO4.7H2O 246.47 370 7.4CaCl2.2H2O 147.02 440 8.8微量元素使用浓度(mg/L) 200×（g/L）KI 166.01 0.83 0.166H3BO3 61.83 6.2 1.24MnSO4·4H2O 223.01 22.3 4.46ZnSO4·7 H2O 287.54 8.6 1.72Na2MoO4·2 H2O 241.95 0.25 0.05 CuSO4·5 H2O 249.68 0.025 0.005 CoCl2·6H2O 237.93 0.025 0.005铁盐使用浓度(mg/L) 200×（g/L）Na2·EDTA 372.25 37.3 7.46 FeSO4·7H2O 278.03 27.8 5.56有机成分使用浓度(mg/L) 200×（g/L）烟酸0.5 0.1盐酸吡哆醇VB6 0.5 0.1盐酸硫胺素VB1 0.1 0.02甘氨酸 2 0.4MS固体培养基1LMS大量（20×）50mlMS微量（200×）5mlMS铁盐（200×）5mlMS有机（200×）5mlMS肌醇0.1g蔗糖30g琼脂8gPH 5.6-5.8MS盐溶液MS大量MS微量铁盐6-BA：用0.1mlNaOH溶解后，再用蒸馏水定容。