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图２．
肿瘤、肝、肺和肾组织内总铂宙量变化
２．３肝、。肾和肺组织中药物含量变化：在肝、肺和肾脏中，ＬＤＤＰ组的总铂含量均明显高于ＣＤＤＰ组 （图２）。肝脏中，ＬＤＤＰ组的总铀含量较其它组织高，峰值达１６．７２±６．６０“ｇ／ｍｌ，其后下降速度平 缓，ＣＤＤＰ组总铂浓度较肿瘤组织和肺脏高，但低于肾脏，其峰值为５．８０±４．０１。肺组织中，ＬＤＤＰ 组总铂含量峰值为８．５８±２．２９９９／ｍｌ，其后下降速度较快，７２ｈ时为３．１４±１．６９肛ｇ／ｍｌ，ＣＤＤＰ组总铂 峰值为２．３７±０．５３垤／ｍｌ。在肾脏中，ＬＤＤＰ组总铂含量的峰值为１０．２２±１．８４ｔｌｇ／ｍ１，其后下降缓慢， 高浓度维持了较长时间，ＣＤＤＰ组总铂含量峰值为７．７８±１．２７“ｇ／ｍｌ，与ＬＤＤＰ组相差不大，但下降速
度较快。比较儿种组织中总铂的ＡＵＣ值，ＬＤＤＰ组均显著高于ＣＤＤＰ组，在肝脏中两者的比值为３．１７，
肺脏中也为３．３０，肾脏中最低，为２．４０，但均明显低于肿瘤组织７．４８倍的比值。
表２．肿瘤、肝、肺和肾组织内总铂ＡＵＣ值
Ｃａｎｃｅｒ ｔｉＳＳＨＣ Ｌｉｖｃｒ ｔｉｓｓｕｅ Ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｄｎｅｙ ｔｉＳＳＵＣ
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ＬＤＤＰ
（腿・ｈ・ｍ１１）
１７５３．８７
（№・ｈ・ｍｌ“）
６９２．０２
（Ｋ・ｈ・ｍ１１）
１２３１．３６
１０１４．９９
ＣＤＤＰ
１３５．７５
５５２．３０
２０９．４４
５１２．０５
３．讨
论
顺铂抗瘤谱广，广泛应用于各种实体瘤的治疗。但顺舶进入机体斤，大部分与血浆蛋白形成牢 同结合而失去抗肿瘤活性，因而需较大的剂量才能在肿瘤组织中达到有效的浓度，因而加大了药物 对人体的毒性反应。顺铀对人体的毒性反应主要为肾毒性和对造血系统的毒性。脂质体对顺铂的包 裹可隔离顺铂与血浆蛋白的结合，延长游离顺铂在机体的循环时间，因而有更多的药物能进入肿瘤 组织中。含聚乙二醇（ＰＥＧ）的脂质体由丁．空间效应，可抑制机体网状内皮系统对脂质体的识别和吞噬
．８８－
破坏，显著延长脂质体在血液中的循环时间。 实验结果显示，ＣＤＤＰ注射后入血后，峰浓度为３．２４“ｇ／ｍｌ，并迅速降，氐，２ｈ后已经血浆已测不 到游离的ＤＤＰ。肿瘤患者注射ＤＤＰ（１００ｍｇ／ｍ２）后，游离铂也在两小时后检测不出，提示游离铂在 体内存在时间较短。而ＬＤＤＰ注射后７２小时之后血液中的游离铂为１．０４心／ｍｌ，其峰浓度是ＣＤＤＰ组 的４倍多，有更多的游离铂存在于血液中且在血液中的循环时间显著延长。另外，根据一些作者试 验，荷瘤鼠接受１．６４—２ｍｇ／ｋｇ的顺铂，能达剑放疗增敏作用，放疗增敏的血药峰浓度约１ｕｇ／ｍ１，故 ＬＤＤＰ给药后７２小时的血药浓度可能仍有临床意义。 ＬＤＤＰ进入血液后，在血浆中的变化过程分两个时相，类似于药动学的两室模型，但其包含的意 义略有不同。初始相顺铂的浓度快速地下降，半衰期为１．２７小时，推测ＬＤＤＰ在体内的进行了快速 分布。其后第二相缓慢下降，半衰期为１９．４７小时，下降的速度可能代表了ＬＤＤＰ在血浆中的破坏速 度，这个破坏速度与ＬＤＤＰ在血浆中释放顺铂的速度是呈正相关的，因此可表征顺铂从ＬＤＤＰ中释放 的速度，这个速度可能是与ＬＤＤＰ药理效应有关的重要参数。 从肿瘤组织的总铂分布看，ＬＤＤＰ组总铂含量是ＣＤＤＰ组的３’８倍；ＬＤＤＰ组总铂的ＡＵＣ值是ＣＤＤＰ组的 ７．４８倍：因此ＬＤＤＰ组进入肿瘤组织的药物显著多于ＣＤＤＰ组。肝、肺和肾脏中，ＬＤＤＰ组总铂含量也 显著高于ＣＤＤＰ组，但比例均小丁．肿瘤组织中两组的比例。从几种组织中ＬＤＤＰ组和ｃＤＤＰ组总铂ＡＵＣ 值的比例看，肿瘤组织中西组ＡＵＣ值比例最高，为７．４８；’肾脏中比例最低，为２．４０；肝和肺均分别 为３．１７和３．３０，肿瘤组织中的比例显著高于其它组织，推测ＬＤＤＰ组药物进入肿瘤组织还有与进入 其它组织不同的机理。ＬＤＤＰ在血液的循环中，不断释放游离顺铂，游离顺铂扩散进入肿瘤组织，这 个途径与顺铂进入其它组织是相同的。但肿瘤内新生的毛细血管结构较正常组织疏松，常为单层内 皮细胞构成，且其间的接触疏松，间隙常人于ｌＯＯｎｍ。将脂质体粒径制成纳米级，则可使其在血液 循环中被动地沉集在肼，瘤组织内（ＥＰＲ效应），而这个粒径的脂质体是不能通过止常组织的毛细血管 的。肾脏毒性是顺铂的主要毒副反应之一，虽然肾脏中两组总铂ＡＵＣ值的比例最小，但还是达２倍 多，肾脏中铂的增加对肾脏功能的影响还需进一步的探索。对其它组织的影响应进一步探索。ＬＤＤＰ 的药动学过程可解释其在我们的药效实验中表现出米的较ＣＤＤＰ抗肿瘤效应强得多的优势。
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Ｔｉｍｅ／ｈ 圈１．血浆游离铂浓度的变化
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－８６．
１．５药物分析 １．５．１血浆游离顺铂浓度测定：采用ＨＰＬＣ法检测血浆中的药物含量。用ＤＤＴＣ与样本中的铂络合， 提取络合物用于测定；以顺铂对照品的生理盐水溶液制备标准曲线，外标法定量计算样本中顺铂的 含量。本方法测定的顺铂含量为游离顺铂及能从蛋白结合中解离出来的铂的含量。分析方法简述如 下：色谱条件：色谱柱为Ａｎｇｉｌｅｎｔ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ柱（２５０Ｘ４ｍｍ，５ｕｍ），流动相为甲醇：水＝７２：２８（ｖ／ｖ）， 流速为ｌｍｌ／分钟；紫外检测波长为２５４ｎｍ。色谱数据用Ａｎｇｉ ｌｅｎｔ色谱工作站处理，外标法定量。样 品处理：精密吸取血浆，用生理盐水定容至ｌｍｌ，加入５％ＤＤＴＣ试液，混匀置于３７℃恒温水浴３０分 钟，取出冷至室温，加入氯仿２ｍｌ，旋涡振荡２分钟充分提取，以２０００ｒ／ｍ离心１０分钟，分离出氯 仿，并用１．５ｍｌ氯仿洗涤残渣，３７℃恒温水浴中用干燥空气吹干。加入ｌＯＯｕｌ氯仿，漩涡震荡３０秒 溶解，１０“１进样。验证分析方法的精密度和准确度，其日内和日间变异均＜１０％。 １．５．２组织中总铂浓度测定：采用石墨炉原子吸收光谱法测定组织中总铂含量。以Ｐｔ标准溶液作标 准曲线，线性范围为１０～２００ｎｇ／ｍｌ，ｒ＝Ｏ．９９９５；日内和日间ＲＳＤ＜ＩＯ％。组织样本（肺脏、肝脏、肾脏 和肿瘤）剪碎，放入消解罐里，加入３ｍＬ硝酸，ｉｍＬ盐酸，２ｍＬ过氧化氢，放置半小时，然后放在电 热板上加热，空白组织样同法处理作参比。消解完全，分别转入到２５ｍＬ容量瓶定容。测定条件：石 墨管类型为涂层非平台型；灰化温度为１２００＂Ｃ；原子化温度为２７００。Ｃ；信号检测为氘灯，灯电流为 ６．ＯｍＡ，波长为２６５．９ｎｍ，带宽２ ｎｆＩｌ：进样量３０“ｌ。 ２结果 ２．１血浆中游离顺铂的变化 两组小鼠血浆中游离顺铂浓度的变化明显不同，ＣＤＤＰ组小鼠在药物注射后血清中游离顺铂峰浓 度为３．２４４７“ｇｌｍｌ，并迅速降低，两个小时后在血液中已经检测不到游离顺铂。ＬＤＤＰ组药物注射后 游离顺铂峰浓度为１３．７９Ｐｇ／ｍｌ，是ＣＤＤＰ组峰浓度的４倍多。在最初几小时内，ＬＤＤＰ组游离铂的浓 度有一个快速下降的过程，其后下降缓慢，维持时间明显延长，在７２小时时仍能检测到其在血液中 的浓度为１．０４ｐｇ／ｍｌ（图１）。用药代动力学软件３Ｐ９７对ＬＤＤＰ的药时曲线进行拟合，药时曲线类似 于药动学两室模型的变化过程，药动学参数见表１。ＬＤＤＰ在注射进入动物体内后，呈现两相性变化， 初始相顺铂的浓度快速地下降，半衰期为１．２７小时，其后第二相缓慢下降，半衰期为１９．４７小时。 由于分析方法检测到的是血浆中游离的顺铂和包裹在脂质体中的顺铂，故初始相的变化表征的是 ＬＤＤＰ在体内的分布速度，第二相的变化可能表征了脂质体在血浆中的破坏速度。
１材料与方法
１．１药品与试剂 普通顺铂注射剂（ＣＤＤＰ），山尔齐鲁制药厂产品，批号０６０９２４。顺铂的对照品，山东齐鲁制药 厂惠赠，纯度９９％，用生理盐水配制成５０．８３ｍｇ／１００ｍｌ准备液备用。Ｏ．９％氯化钠注射液，四川科伦 药业股份有限公司产品，批号Ａ ０６１０２２Ｄ。ＤＤＴＣ，前用０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ溶液配制成５％的试液备用。Ｐｔ 标准水溶液（１．０ ｇ／Ｌ）购至上海计量测试技术研究院。硝酸、盐酸、过氧化氢、甲醇和氯仿均为分 析纯。 １．２仪器
Ａｇｉｌｅｎｔ １１００高效液相色谱仪，美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司产品，包括Ｇ１３１１Ａ四元泵，Ｇ１３２２Ａ脱气机， Ｇ１３２８Ａ进样器，Ｇ１３１５Ａ二极管阵列检测器；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＢＰ２１１Ｄ分析大平，Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司产品；ＤＣ一１２Ｈ
恒温水浴锅，上海安谱科学仪器有限公司产品；离心机，司产品。 １．３顺铂长循环纳米脂质体（ＬＤＤＰ）的制备
顺铂纳米脂质体体内变化的实验研究
葛勇前１张晓萌２杨焕军２陆国椿１王漪璇１蒋国梁２芮蒙杰３陈剑３干欣欣３徐宇虹’ （１复旦大学附属肿瘤医院药剂科、２放疗科，上海２０００３２３上海交通大学药学院，上海２００２４０）
顺铂（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ，ＤＤＰ）是一种高效广谱的抗肿瘤约，不仅能杀伤肿瘤细胞，抑制细胞修复， 还具有较强的放疗增敏作用。但是，顺铂进入体内后，大部分与血浆蛋白形成难以解离的结合物， 失去抗肿瘤作用，因此怎样避免或减少ＤＤＰ与血浆蛋白的结合，提高ＤＤＰ的有效生物利用度，是目 前ＤＤＰ研究的热点。脂质体特别是长循环脂质体技术的发展提供了解决问题的有效手段，脂质体的 包裹隔离了ＤＤＰ与血浆蛋白的接触，延长了游离ＤＤＰ在体内的循环时间，纳米级的脂质体还能穿过 肿瘤新生毛细血管，在肿瘤内聚集，大大提高ＤＤＰ在肿瘤内的浓度，同时还能减少ＤＤＰ进入正常组 织的量，从而减低ＤＤＰ的毒副反应。本文报道我们制备的ＤＤＰ的长循环纳米脂质体在小鼠体内的变 化过程。