麦康凯培养基—具中等强度选择性， 麦康凯培养基—具中等强度选择性，抑菌力
略强，少数阴性菌不生长。 略强，少数阴性菌不生长。 1、利用胆盐、龙胆紫来抑制革兰阳性细菌的生 长，而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用． 2、利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳和 不分解乳糖的细菌区别开． 沙门菌及志贺菌呈无色菌落， 沙门菌及志贺菌呈无色菌落， 大肠埃希菌呈 大肠埃希菌呈桃红色菌落．
动物尸体剖解顺序
观 察 体 表 剥 皮 皮肤消毒 切开颈腹部皮肤 开腹腔 观察病变
观 察皮下病 变 开 胸 腔 观 察病 变
观察内脏病变 开胃肠
肠道菌实验室诊断包含的微生物 实验技术：
无菌操作技术 显微镜使用技术 培养基制备技术 细菌分离纯化技术 细菌染色技术 微生物的消毒灭菌技术 动物实验技术
沙门氏菌、 沙门氏菌、大肠杆菌的一般诊断程序图
病料
37℃、18-24h ℃ 选可疑菌落，移植到以下培养基 选可疑菌落， 37℃、18-24h ℃ 营养琼脂斜面 纯种检验、 纯种检验、革兰氏染色镜检
增菌（亚硒酸盐汤等） 增菌（亚硒酸盐汤等） 37℃、18-24h ℃
培养基） 直 接 划 线 分 离（麦 康 凯 、 SS 琼 脂和EMB培养基） 培养基
实验九
大肠杆菌
大肠杆菌：是引起家畜、家禽大肠杆菌病的病原。 大肠杆菌：是引起家畜、家禽大肠杆菌病的病原。 可导致家畜、家禽死亡；大肠杆菌是条件致病菌。 可导致家畜、家禽死亡；大肠杆菌是条件致病菌。
心包炎、肝周炎
实验目的： 实验目的
1、学习大肠杆菌与沙门氏菌常规微生物学诊断方法。 、学习大肠杆菌与沙门氏菌常规微生物学诊断方法。 大肠杆菌与沙门氏菌常规微生物学诊断方法 2、了解大肠杆菌与沙门氏菌的形态与染色特性。 、了解大肠杆菌与沙门氏菌的形态与染色特性。 大肠杆菌与沙门氏菌的形态与染色特性 3、熟悉大肠杆菌与沙门氏菌的主要培养特性。 、熟悉大肠杆菌与沙门氏菌的主要培养特性。 大肠杆菌与沙门氏菌的主要培养特性
三糖铁琼脂
生化反应
血清学鉴定
内脏、淋巴结 内脏、
病毒材料
50%甘油磷酸盐缓冲液 甘油磷酸盐缓冲液
病料的采集 包装、 包装、运送
液态材料
小家畜、 小家畜、家禽或胎儿
【动物尸体剖解的注意事项】
怀疑死于炭疽的动物严禁尸体剖解。 怀疑死于炭疽的动物严禁尸体剖解。 有针对性的采集病料。 有针对性的采集病料。 作好个人的防护和环境消毒工作。 作好个人的防护和环境消毒工作。 盛装病料的容器要求无菌。 盛装病料的容器要求无菌。 无菌操作。 无菌操作。 病料必须注明名称。 病料必须注明名称。 必须低温保存,及早送检。 必须低温保存,及早送检。 动物尸体必须妥善处理(深埋、焚烧) 动物尸体必须妥善处理(深埋、焚烧)。
观察、 观染色方法： 姬姆萨染色方法：
1、触片、干燥。用甲醇固定3-5分钟。 触片、干燥。用甲醇固定3 分钟。 2、将固定的触片浸于盛有稀释液的染色缸中（姬姆萨原液 将固定的触片浸于盛有稀释液的染色缸中（ 10滴加于10毫升中性或弱碱性蒸馏水中即可），染色30-60 10滴加于10毫升中性或弱碱性蒸馏水中即可） 染色30滴加于10毫升中性或弱碱性蒸馏水中即可 30 分钟，或过夜。 分钟，或过夜。 3、水洗、干燥。 水洗、干燥。 4、镜检：细菌呈蓝黑色，组织、细胞等呈其他色。 镜检：细菌呈蓝黑色，组织、细胞等呈其他色。
EMB（Eosin Methyl Blue)平板－分离肠道 （ 平板
病原菌的弱选择培养基
病原菌： 透明， 病原菌： 透明，无色 非致病菌： 非致病菌：紫黑色
本次实验操作步骤： 本次实验操作步骤：
解剖病死鸭
心脏、 心脏、肝脏等脏器的分离接种 平板、 （SS平板、三糖铁琼脂） 平板 三糖铁琼脂）
37℃、18-24h ℃ 组织触片（血片、肝片等） 、吉姆萨染色、镜检 组织触片（血片、肝片等） 吉姆萨染色、
大肠杆菌与沙门氏菌的常规 实验室诊断可按阶段划分
阶段划分（ 阶段） 阶段划分（1— 4阶段） 阶段
第一阶段：增菌、 第一阶段：增菌、直接分离培养 第二阶段：纯培养、识别菌落、三糖铁接种。 第二阶段：纯培养、识别菌落、三糖铁接种。 第三阶段：生化鉴定（IMViC、H2S、硝酸盐还原、运动力、五种糖） 第三阶段： 、 、硝酸盐还原、运动力、五种糖） 第四阶段：血清学鉴定。 第四阶段：血清学鉴定。
作业：
1、鸭大肠杆菌病的实验室诊断意义、步骤。 鸭大肠杆菌病的实验室诊断意义、步骤。 2、绘出油镜下组织触片的大肠杆菌形态图。 绘出油镜下组织触片的大肠杆菌形态图。
思考题：
1、大肠杆菌和沙门氏菌在和培养特征上有何 差异？ 2、试述生化试验在肠杆菌科细菌的鉴定与诊 断中的意义。
SS平板 SS平板－分离肠道病原菌的强选择培养基 平板－
成分和作用： 成分和作用：
1、基础培养基：提供氮源和碳源 基础培养基： 2、胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌的生 胆盐、枸橼酸钠、煌绿： 长，而对肠道致病菌抑制作用弱。 而对肠道致病菌抑制作用弱。 3、乳糖，中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄） ：致病菌 乳糖，中性红（pH6.8-8.0， 橙黄） 不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→ 不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄 色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色 大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色