柑橘果实糖、酸、VC含量的测定方法熊庆娥（农业大学）Eleven手打第一部分测定程序及计算公式建议先通读这些方法几遍，借好仪器，想好人员分配后，再到实验室一、样品制备样品果至少10个。

擦净果皮后，用水果刀在每个果对称位置切取两块。

去皮后，用纱布包裹好果肉，挤压果汁于干燥烧杯中，总量不低于100ml。

样品液混合搅拌均匀后，可供测定可溶性固性物（TSS）、糖、酸、Vc。

二、总酸含量的测定1．用移液管将5ml果汁转入100ml三角瓶，加酚酞1—2滴，用0.1N NaOH （以标定浓度为准）滴至溶液出现粉红色不消失至。

记录滴定所消耗NaOH量。

重复3次。

2．总酸含量（g/100ml）=V：NaOH滴定用量 N：NaOH浓度（标定为准）B：被滴定样品用量（5ml） 0.064：柠檬酸折算系数Eleven补充分析：② N表示mol/L。

② 0.064的来历: 折算系数即1ml氢氧化钠溶液摩尔浓度柠檬酸的质量。

NaOH与柠檬酸的反应中，NaOH与柠檬酸的比例是1:3。

柠檬酸的分子量为192.14。

假设氢氧化钠浓度为A mol/L，即 A mol/ml。

1ml氢氧化钠溶液与柠檬酸反应，则柠檬酸用量为 A mol。

柠檬酸质量为A192.14=0.06405A。

三、Vc含量的测定1．取果汁5ml，用1%草酸稀释，定容至50ml。

即稀释10倍。

用移液管吸取稀释液5ml至50ml三角瓶，通过半微量滴定管滴入2，6D至溶液呈粉红色且30秒不退色。

记录所耗2，6D用量。

重复三次。

2. Vc含量（mg/100ml）=V: 2,6-D滴定用量 A：每毫升2，6-D相当的Vc量（mg）B：滴定所用样品量（5ml） C: 样品稀释倍数（10）Eleven分析补充：抗坏血酸在溶液中易氧化，在整个测定中，操作应迅速。

滴定开始时，染料迅速加入，直至红色不立即消失，而后逐滴加入，并不断摇动锥形瓶直至终点，整个滴定时间不宜超过2.分钟。

所有试剂配制，都需用重蒸馏。

三、糖含量的测定1.还原糖的测定用移液管吸取果汁10ml，转入100ml容量瓶，加水稀释定容到刻度，装入酸式滴定管。

用移液管分别吸取斐林液A、B各5ml于200ml三角瓶，摇匀后，加蒸馏水约30ml，置电炉上煮至沸腾。

继续保持沸腾，并用样品液滴定至蓝色大部分减退，加次甲基蓝2滴，继续滴定至溶液刚好转砖红色止。

记录样品滴定值（ml），重复三次。

2.转化糖的滴定用移液管吸取果汁10ml，转入100ml容量瓶，加6N HCl 5ml，置沸腾水浴上水解15分钟。

溶液冷却后，用NaOH中和酸(先用6N NaOH 5ml，后滴加0.5 N NaOH)，以酚酞2滴指示。

加NaOH至溶液显红色即是终点，此为转化糖测定液。

将转化糖液装入酸式滴定管，用以滴定菲林液，方法同还原糖。

注: 无色的还原型亚甲基蓝极易被空气中的氧所氧化，应调节电炉温度使瓶溶液始终保持沸腾状态，液面覆盖水蒸气不与空气接触。

整个滴定过程锥形瓶不能离开电炉随意摇动.3.糖含量的计算公式还原糖含量(g/100ml)= 1000转化糖含量(g/100ml)= 1000蔗糖含量（g/100ml）=（转化糖—还原糖）×0.95总糖含量（g/100ml）=还原糖＋蔗糖D ：10ml（5＋5）斐林液相当的葡萄糖含量（g）,标定的为准。

：还原糖液滴定值（ml）。

：转化糖液滴定值（ml）。

Eleven补充分析：原来式子为“还原糖含量(g/ml)= 1000”，Eleven以为应该是有100的式子表示每毫升果汁相当的葡萄糖的量。

1000可分解为10100，10是稀释倍数，100就是100ml。

如果原式单位不加100，下面的蔗糖含量算法的100也不好解释。

还原糖：能够还原斐林试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮），不论醛糖、酮糖都是还原糖。

大部分双糖也是还原糖，蔗糖则例外。

转化糖：用稀酸或酶对蔗糖作用后所得含等量的葡萄糖和果糖的混合物。

蔗糖具右旋光性，而反应生成的混合物则具有左旋光性，旋光度由右旋变为左旋的水解过程称为转化。

故这类糖称转化糖。

式子分析：蔗糖含量（g/100ml）=（转化糖—还原糖）×0.95。

蔗糖水解后生成葡萄糖和果糖，都能与斐林反应，相对分子质量也都是180。

（转化糖—还原糖） =（蔗糖水解的葡萄糖 + 果糖 + 未酸解时的还原糖 - 未酸解时的还原糖）。

就等于蔗糖的分子量加一个水，也就是360，蔗糖分子量是342，所以乘以0.95。

补充说明：以上补充参考，还原糖与转化糖参考百度百科。

0.95与0.064属于本人推敲结果。

其余补充大都采用国家标准以及国家标准中特别提醒的注意事项。

详情参见GB8210—87《中华人民国国家标准—出口柑桔鲜果检验方法》。

以下药品配制也是如此。

第二部试剂配制与标定一、滴定酸用试剂1.0.1N NaOH 2g NaOH溶于500ml蒸馏水。

2.1%酚酞 0.5g酚酞溶于50ml 80%的乙醇。

3.1%邻苯二钾酸氢钾称取经100—125 ℃烘干的邻苯二钾酸氢钾1g左右（精确到0.0001g）加蒸馏水溶解。

定容至100ml，用以标定NaOH。

4.NaOH的标定，准确吸取邻苯二钾酸氢钾10ml至三角瓶中，加酚酞1—2滴，用NaOH滴至粉色出现止。

记录NaOH消耗量（ml），重复三次。

NaOH浓度（N）=W : 邻苯二钾酸氢钾的质量（g）：用于标定邻苯二钾酸氢钾量（ml）：记录NaOH消耗量（ml）204.2：邻苯二钾酸氢钾的当量Eleven补充分析：原式应该=，左边有字母一项应该不难理解，=NaOH摩尔质量，除以100就是摩尔浓度，乘以1000是NaOH的那个单位（N）。

即是mol/L的意思。

GB指出应精确称取经120℃烘2h以上的基准试剂邻苯二甲酸氢钾(准确至0.OO Olg)二、滴定Vc用试剂1.1%草酸 5g草酸溶于500ml蒸馏水。

2.2，6-D 称取52mg NaHC,溶于50ml蒸馏水，煮沸。

再称取2，6-D 50mg，加入沸腾的NaHC液，溶解后冷却，转入250ml容量瓶，加水定容。

3.Vc（用于标定2，6-D）称取烘干Vc（抗坏血酸）20mg（精确至0.1mg），溶于1%的草酸，定容至100ml。

用移液管吸取5ml转入50ml容量瓶，加草酸定容（稀释了10倍）。

现配现用。

准确吸取Vc稀释液5ml转入100ml容量瓶，用2，6-D滴至粉红色，30秒不消退止。

记录所耗2，6-D量（ml），重复三次。

计算1ml 2，6-D相当的Vc毫克数（A）。

A =W：Vc重量（mg）：滴定取Vc稀释液量（5ml）D：2，6-D滴定值：Vc液总体积（ml），含稀释倍数三、测定糖用试剂1.斐林A 硫酸铜（CuS·5O）34.639g溶于蒸馏水，定容至500ml。

2.斐林B 酒石酸钾钠173g、 NaOH 50g溶于蒸馏水，定容至500ml。

3.6N HCl 取浓HCl 250ml加入250ml蒸馏水中。

4.6N NaOH 120g NaOH溶于500ml蒸馏水。

Eleven补充：第4项如果配的不是很准确也不用担心，准确最好不过。

5.1% 亚甲基蓝 0.5g亚甲基蓝溶于50ml蒸馏水。

6.葡萄糖（标定用）在分析天平上准确称取葡萄糖1g左右（精确至0.0001g），加水溶解定容于200ml容量瓶，即约5mg/ml葡萄糖。

7.斐林液的标定用上述葡萄糖液滴定10ml斐林液，滴定方法同还原糖测定。

记录葡萄糖滴定值（ml），重复三次。

计算10ml斐林液相当的葡萄糖克数（D）。

D =W : 葡萄糖的重量（g）。

：葡萄糖液总体积（ml）。

：葡萄糖滴定值（ml）。

第三部分关于实验一、关于仪器仪器方面不同样品量用的仪器稍有差别，记得自己先阅读本方法，然后根据自己情况借取仪器，电炉最好能拿两个，六教比较不好借的就是电炉和称。

一般是找汤福义老师借。

药品如果导师没有可以到瑞进特买，他们送货上门（不加钱），川农一般都是在那买（除了在学校开了账户的老师外），蒸馏水用的是新区开水房特制的蒸馏水，他们也送货上门，10元左右。

送货上门加2元。

二、关于配药量配药要根据自己样品数量自己调整，所以去实验室前有必要将方法牢记于心，配药前最好再看一遍。

三、注意事项①一些玻璃仪器不能混用，要混用时要记得洗干净。

比如斐林A、B的移液管。

②三角瓶在电炉上加热时要确保瓶底我明显水迹。

③变色的标准要统一，切忌随意改变负责该项目的实验人员。

④离开实验室记得将酸、碱式滴定管取下，平放。

⑤做完实验不应该立即倒掉药品及分食水果，待将数据整理确保无明显问题后才可。

四、经验提醒我觉得实验的核心是人员以及实验器材的分配协调。

要物尽其用，人尽其才，实验才能得以顺利进行。

品质分析的实验最重要的不是测定的过程，而是以后的数据分析，做后你自然明白。

但是并不是说测定过程不重要，毕竟巧妇难为无米之炊。

五、关于该实验方法该实验方法是Eleven获得了熊老师的手稿后进行加工与修改的。

这个实验Eleven做了数次、包括测定樱桃、子、猕猴桃、柑橘类。

也就是说该实验方法适合于较多水果，但是对于不同蔬菜、水果，方法可以略作改动。

改动标准建议登陆。

下载国家标准，进行整合后根据自己实验情况进行修改。

欢迎对该实验方法提出建议及意见，也欢迎与Eleven进行探讨。

熊庆娥：1998年12月8日于三台1999 年 1月修改于Eleven（香橼）：2010年3月30日夜补充于10舍517。