放射性核素标记免疫分析
概念： 一种将放射性核素测量的高灵敏性、高精确
性和抗原抗体反应的高特异性相结合的体外测定 超微量（10-9～10-15g）物质的新技术。
IRMA(非竟争结合)反应原理
IRMA(非竟争结合)剂量反应曲线
RIA ＆ IRMA 的区别
方法
RIA
1.标记
*Ag
2.免疫反应式
Ag+*Ag+Ab *Ag-Ab+Ag
3.Ab
限量
4.竞争 5.测量复合物 6.测量物计数值与标本含量 7.标准曲线形态
竞争 *Ag-Ab 呈反比╲来自8.灵敏度较低
9.测量范围
较窄
IRMA
*Ab Ag+*Ab Ag-*Ab+*Ab
过量 非竞争 Ag-*Ab 呈正比
╱ 高 较宽
第二节 体外标记免疫分析的基本试剂和 基本技术
基本试剂和基本技术
１. 标准品、质控品 ２. 特异性抗体 ３. 示踪剂(标记品) ４. 分离技术
１. 标准品
(1)化学结构: 应与待测物具有相同的化学结构 (2)化学纯度：高度纯化 (3)化学度量： 准确 (4)稳定性：不易变质、不易降解
核医学
核医学
第六章 体外标记免疫分析
体外标记在核医学中的地位
体内诊断：脏器显像
功能测定
诊断 体外诊断：放射分析
临床核医学 治疗：131I治疗甲亢
核医学
实验核医学：利用核技术探索生命现象的本质和物
质变化规律
体外标记免疫分析
体外标记免疫分析是一门综合性学科，也是一 门边缘学科。是集基础医学、实验医学及临床应用 于一体的学科。在当前的各种免疫诊断技术中，标 记免疫分析是最活跃、发展最快的一个领域。
依所测得的复合物的放射性计数(CPM)，对比标准品剂量反应曲线，求知待测品的含量
免疫放射分析(IRMA)原理
单位点： Ag + *Ab (Ag-*Ab) + *Ab
抗原（待测） 标记抗体 抗原标记抗体复合物
双位点： Ad-Ag + *Ab Ad-Ag-*Ab
固体抗体-抗原（待测） 标记抗体 固体抗体-抗原-标记抗体复合物
固相分离法
微孔滤膜法
双抗体法
分离方法
盐析法
磁化颗粒法
活性炭吸附法
第三节 体外标记免疫分析的类型
体外标记免疫分析的类型
体外标记免疫分析
放射性核素标记 免疫分析
(RIA、 IRMA)
酶标记 免疫分析
时间分辩荧光 免疫分析
发光标记 免疫分析
(化学发光标记免疫分析 化学发光酶免疫分析 电化学发光免疫分析)
实验操作步骤： 加样（Ag，*Ag，Ab) →混匀，温育（反应达到平
衡）→分离→测量→数据处理，质量控制
测量复合物计数示意图：
测量
光子(射线能)与闪烁体的作用 ↓
闪烁体(光脉冲、光能) ↓
光电倍增管(电能) ↓
前置放大器(电脉冲) ↓
电子探测仪
（计数单位是探测器输出的电脉冲数，CPM或CPS）
RIA(竞争性结合)标准品剂量反应曲线
２. 特异性抗体
(1)亲和力大 (2)高滴度 (3)特异性强 (4)可长期保存
３. 示踪剂（标记品）
（1）高比活度 （2）生物活性与免疫活性与标记前一致 （3）化学纯度>95% （4）稳定性好：标记品不易脱落
４. 分离技术---要求
(1)结合部分与游离部分尽可能完全分开 (2)非特异性结合率（NSB%）低，小于5% (3)分离的成分便于测量 (4)分离效果不受外界环境影响 (5)分离试剂操作简便、价廉易得
体外标记免疫分析
鼻祖:
(Yalow,July 19, 1921 –)
美国科学家Yalow和Berson。 于1956年创建的放射免疫分析(RIA)，测定人血浆胰岛素 获得成功。树立了超微量物质体外标记免疫分析的里程碑。 1968年，Miles和Hales建立了免疫放射分析(IRMA)。
体外标记免疫分析
体外标记免疫分析
发展:
电化学发光免疫分析 化学发光酶免疫分析
化学发光标记免疫分析
时间分辨荧光免疫分析
酶标记免疫分析
放射受体分析
免疫放射分析
放射免疫分析
体外标记免疫分析
分类
竞争放射结合分析：标记抗原，抗体限量 非竞争放射结合分析：标记抗体，抗体过量
第一节 体外标记免疫分析的基本原理
体外标记免疫分析
获奖:
在1977年Yalow和Berson因创建了放射免疫 分析，使微量物质的测定成为可能，而荣获诺贝 尔生物医学奖 。
体外标记免疫分析
贡献: 随着基础医学和相关技术的发展，在RIA标记
抗原竞争性抑制结合、IRMA标记抗体非竞争性结 合的理论基础上，相继派生出许多其它的标记免 疫分析方法，如酶标记免疫分析、时间分辨荧光 免疫分析、化学发光免疫分析、电化学发光免疫 分析等多种形式、多种反应模式的综合性标记免 疫分析体系，并广泛应用于基础医学、临床医学 、教学及科研诸多领域，有力地推动了医学科学 的发展。
体外标记免疫分析
概念： 是利用放射分析方法或其派生的相关
非放射分析技术测定生物样品中微量生物 活性物质含量的一类分析方法。
体外标记免疫分析
特点：
利用抗原－抗体结合反应的特异性，加上 各种标记物（标记抗原或抗体）的可测量性来 达到方便敏感地检测各种体内微量生物活性物 质，包括内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、 神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、 肿瘤标志物、血药浓度等。
Ag １. *Ag:定量、足量 ２. Ab:限量、特异 ３. *Ag和Ag具有相同的免疫活性 ４. Ag+ *Ag>Ab的有效结合位点 ５. *Ag和Ag通过竞争的方式与Ab 结合，随着Ag增加， *Ag与Ab结合 形成的*AgAb复合物的量减少
Ag* Ab
C
FAg* B F B/F
放射免疫分析（RIA）
基本原理:
体 外 标 记 免 疫 分 析
竞争性(标记抗原) RIA
非竞争性(标记抗体) IRMA
放射免疫分析（RIA）原理
放射免疫技术是标记抗原与未标抗原竞争有限量 的抗体，然后通过测定标记抗原抗体复合物中放 射性强度的改变，测定出未标记抗原量。
放射免疫分析（RIA）原理 放射免疫分析（RIA）原理
Ag
待测抗原
+ *Ag + Ab *AgAb + *Ag
(标记抗原) (特异性抗体) (标记抗原抗体复合物) (游离的标记抗原)
AgAb + Ag
抗原抗体复合物
标记抗原(*Ag)和非标记原(Ag)与限量抗体(Ab)竞争结合。 *Ag和Ag具有相同的与 Ab结合的能力
RIA(竞争结合反应)原理示意图