微生物限度检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌 检查； 关键点：检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。 微生物限度检查应在洁净度10000级下的局部洁净度100级的单 向流空气区域内进行。 洁净室环境要求：温度应控制在18～26℃，相对湿度控制在45 ～65%。 不同洁净级别之间的静压差应≥10Pa，洁净室与非洁净室之间 的静压差≥10Pa。
灭菌
湿热灭菌：将计过数的细菌平板和霉菌平板以及配制好
的缓冲液、培养基放入压力蒸汽灭菌锅中，在121℃下灭 菌15min。
干热灭菌：将实验待用的空平板以及滴管、药匙放入烘
箱内，在170～180 ℃下灭菌1h。
紫外灭菌：将待检样品放入传递窗内紫外照射30min。此
外，超净工作台在使用前也要用紫外灭菌照射30min。


熟悉了微生物检验室的日常工作流程；
掌握了微生物限度检查操作（无菌操作）。
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个人能力提升：
1.对微生物及微生物限度检查有了一定的概念。 2.对微生物室的日常工作流程有了清晰的认识。 3.能够熟练进行微生物检验的无菌操作。
感悟：
小小的微生物却对人类的生命健康产生严重的威胁。千里之堤毁
紫外线灭菌
紫外灯
紫外线灭菌法
75%乙醇、84消毒 仅对细菌繁殖体有效，不能 消毒剂灭菌 液、0.1%新洁尔灭 浸泡与表面消毒法 杀死芽孢，用于表面消毒， 如超净工作台
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取平板：每天进入洁净区，分别从细 菌培养箱和霉菌培养箱中拿出培养了 3天的细菌平板和5天的霉菌平板。 菌落计数：分别点计细菌板上的细菌 数和霉菌板上的霉菌数，将结果输入 电脑中。 配制当天所需量的PH7.0氯化钠-蛋白 胨缓冲液、营养琼脂培养基、玫瑰红 钠琼脂培养基。 培养基：通常，用营养琼脂培养细菌 ，玫瑰红钠培养霉菌、酵母菌。
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菌落辨别经验分享
细菌 很湿或较湿 透明或稍透明 霉菌 干燥 不透明 酵母菌 较湿 稍透明 大而突起 不结合 单调，一般呈乳脂或矿 灼色，少数黑色或红色 相同 单个分散或假丝状 含水状态
基结合程度 菌落颜色 菌落正反面颜色 相互关系
小而突起或大而 大而疏松或大 平坦，表面光滑 而致密 不结合 多样 相同 单个分散或有一 定排列方式 结合较牢固 十分多样 一般不同 丝状交织
固体制剂）放入100ml缓冲液中充分溶解、混匀，制成1 ：10浓度的均匀供试品溶液 。
如果是PVC或铝箔，取100cm2加入100ml缓冲液中。 初元、参灵草、健儿消食口服液以及纯化水不用稀释，
用原液作为供试液。
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供试品的细菌、霉菌、酵母菌菌数的测定

平皿法：用滴管取供试液1ml加入到平皿中，注入15~20 ml温度 不超过45℃的溶化的相应培养基，混匀，凝固，倒置培养。 薄膜过滤法：取滤过的滤膜平贴于已凝固的相应培养基，倒置 培养。
江西中医学院中药学专业硕士生
学习工作报告
姓 名：xxx
所在部门：质检中心
学习岗位：微生物检验 汇报时间： 2013 年 6月12 日
一期带教学习概述/工作亮点
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带教基本情况

岗位：微生物检验 带教老师：嘻嘻嘻 带教期限：2013年3月13日－6月12日
学习概述：

学习了实验室安全管理知识；
于蚁穴，任何小的纰漏都可能造成巨大的损失，微生物检验作为
药品、食品质量检验的一部分，担当着重要的角色。而要做好微 生物检验工作，更要用心、细心、耐心。
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微生物室工作流程
超净工作台 取平板 菌落计数
为什么都要 灭菌？
灭菌
配制缓冲液、 培养基
实验所用器具
样品
电脑登样
微生物检验
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为什么都要灭菌？
细菌和霉菌对人体和环境都有危害，所以长有细菌、霉
菌的平板必须经湿热灭菌后，然后用自来水清洗掉。
凡是实验中需要和样品直接接触的物品（包括样品的外
包装、培养皿、培养基、缓冲液、滴管、药匙等）以及 超净工作台都要经灭菌处理，避免样品在实验前、实验 中被污染，影响检验结果的准确性。
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供试品的细菌、霉菌、酵母菌菌数的阴性对照：取缓冲液1ml， 置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
供试品的细菌、霉菌酵母菌菌数的培养和计数：细菌培养3天， 以3天的菌落数报告；霉菌培养5天，以5天的菌落数报告。

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微生物检验——无菌操作
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要点


细菌及控制菌培养温度为30℃～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为 23℃～28℃。 一般供试品的检验量为10g或10ml；包材如PVC、铝箔为100cm2。 贵重药品如蚓激酶、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查 沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g用于阳性 对照试验）。 样品进入洁净区到实验结束不得超过1小时。
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工作中不同灭菌方法比较
灭菌设备 高温烘箱 归类 干热灭菌法 适用对象 耐高温的玻璃、金属制品， 如培养皿、滴管、药匙
灭菌方法 干热空气灭菌
热压灭菌
灭菌锅
湿热灭菌法
可以杀死所有细菌增殖体和 芽孢，用于耐热压的任何物 品，如缓冲液、培养基等。 穿透能力弱，广泛用于空气 与表面灭菌，如样品外包装 、超净工作台
净化台在使用前，开启紫外灯灭菌30min；


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人员和样品进出洁净区的相关程序
实验操作人员依次通过一更室、二更室进入洁净
区内，并更换洁净服，佩带一次性手套、口罩等 ；
样品和其他实验器具则通过传递窗进入洁净区内
。
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供试液的制备
将待检样品（消食片、草珊瑚、古优、痔康片、感止等
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不足及应对措施
不足：对于控制菌的检查没能熟练掌握。 应对措施：熟悉控制菌检查的操作规程，在以后的 实习工作中提前预习，有问题立即请教老师，做好 准备工作，积极参与微生物实验。
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学习心得
从一开始进入微生物室一片茫然，到现在能够熟练进行
日常基本工作，这期间不仅有我自己的努力，更有老师 们耐心地教导。



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新版GMP中的A、B、C、D级洁净区级别与 百级区、万级区、十万级区区别
A级对应的是动态百级，即在动态条件下应仍为百级； B级对应的是静态百级，即在静态条件下满足百级即可，
在动态条件下可以符合万级标准，
C级对应万级，静态条件下符合万级标准，动态条件下符
合D级标准，即十万级；
如果细菌板上长霉菌， 霉菌板上长细菌怎么 计数？
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如果细菌板上长霉菌，霉菌板上长细菌 怎么计数？

若营养琼脂培养基上长 有霉菌和酵母菌、玫瑰 红钠琼脂培养基上长有 细菌，则应分别点计霉 菌和酵母菌、细菌菌落 数，以菌落数高的培养 基中的菌数为计数结果 。
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微生物检验

D级对应十万级。
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微生物检验流程图
细菌、霉菌菌数测定
实验前的准备
供试液的制备
控制菌的测定
控制菌的阳性对照测定 控制菌的阴性对照测定
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实验前的准备

实验所用的试剂进行湿热灭菌操作，达到无菌要求。

实验所用的玻璃器具及金属容器进行干热灭菌操作， 达到无菌要求。 无菌室及净化台须用84消毒液、75%乙醇溶液、0.1%新 洁尔灭溶液每月交替使用。
实践和理论是有很大差别的，只有在实践中不断地犯错
，不断地吸取教训，积累经验，将理论知识在实践中体 现，从理性认识上升到感性认识，最后再回归到理性认 识，如此反复，才能真正掌握这项技能，领悟到学习的 乐趣。