1.革兰氏染色的机理和步骤机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，抗脱色能力的差异。
主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。
G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。
乙醇脱色时CW脱水，孔径减少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。
G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。
乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，透性升高，细胞被复染显红色。
步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。
②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。
③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。
④媒染: 以碘液媒染1min，水洗，吸干水分。
(细胞内形成结晶紫与碘的复合物，增强相互作用）⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应适当振荡均匀，是乙醇脱色完全。
⑥水洗，吸干。
⑦复染：??(第2张）复染30s，水洗吸干。
⑧干燥镜检。
2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。
芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及皮层的离子强度很高，这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核心中水分，其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水，正是这种失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。
3、引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应，并说明如何能够维持微培PH稳定。
答：培养过程中，由于营养物质被分解利用，代谢产物的形成与积累，会导致PH变化。
（第2张中的图）还与培养基的C/N比有关，C/N高，经培养基后PH显著下降，C/N 低，经培养基后PH明显上升。
PH调节：①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐，K2HPO4 呈碱性，KH2PO4 酸性，只在一定的PH范围内调节（6.4--7.2）②大量产酸的菌株，加CaCO3调节，CaCO3难溶于水，不会使培养液的PH过度增加，但可不断中和微生物产的酸。
③培养液中存在天然的缓冲系统，如AA，肽，Pr均属两性电解质，也起缓冲的作用。
④过酸：治标------加NaOH、Na2CO3中和，治本-----加适量氮源：NaNO3、Pr、NH3·H2O；增加通风量。
⑤过碱：治标-----H2SO4、HCl中和，治本----加适量碳源:G类，脂类;减小通风量。
3、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？抗生素法（青霉素法）：适用于细菌。
原理：青霉素抑制肽聚糖链间的交联，组织了合成完整的CW，野生型B处于正常生长繁殖，所以对青霉素敏感，可被抑制或杀死；营缺B在基本培养基上休眠状态存活下来，从而达到浓缩营缺型目的。
制霉菌素法适用于真菌，其可与cm上？（第1张）醇作用，引起cm损伤，因为它只能杀死生长繁殖着的真菌，所以......菌丝过滤法:基本培上，野生型霉菌，？菌的孢子能萌发并长成菌丝，而缺型孢子一般不萌发，或不能长成菌丝，因此培养一段时间后，用灭菌脱脂棉或滤纸滤去菌丝，收集滤液，重复数遍后可除去大部分野生型，从而……4、生产蛋白酶的枯草芽孢杆菌发生遗传变异，使得产量性状下降，你如何解决？写出具体实验方案。
答：将一定量的枯草芽孢杆菌培养液，做一定浓度的稀释，涂布在含有酪素蛋白质的基本培养基上，37°C培养一段时间后，取出培养基，观察单菌落形成的透明圈大小，取透明圈直径与菌落直径之比较大的菌落，挑取培养做进一步的鉴定，即可得到高产蛋白酶的枯草芽孢杆菌。
5、以磺胺为例，说明化学治疗机的作用机制。
答：机理:磺胺是叶酸组成部分对氨基苯甲酸的结构类似物，（磺胺类药物取代对氨基苯甲酸，干扰叶酸的合成，抑制了转甲基反应，导致代谢紊乱，从而抑制B生长），磺胺的抑菌作用是因为许多细菌需要自己合成叶酸而生长，磺胺对人体细胞无毒性，因为人体缺乏从对氨基苯甲酸合成叶酸的相关酶-----二氢叶酸合成酶，不能用外界提供的对氨基苯甲酸自行合成叶酸，而必须直接利用叶酸为生长因子进行生长。
（磺胺类----与正常代谢产物竞争酶的活性中心，干扰了酶的功能，从而干扰代谢的正常进行）。
6、画出生长曲线。
（第1张）1、微生物的共性？哪个最基本?答：①体积小，面积大（最基本）②吸收多，转化快③生长旺，繁殖快思适应性强，易变异⑤分布广，种类多。
2、比较G+，G- B在CW结构，组成，对溶菌酶，青霉素的敏感性4方面的异同点。
3、表型延迟现象？如何克服？答：表型延迟：表型的改变落后于？（第四张）改变的现象，分为①分离性延迟;突变的？经DNA复制和细胞分裂后变成纯合状态，表型才能表现出来。
②生理性延迟;杂合状态→纯合状态，仍不能表现出来，（如营缺型）通过中间培养（CM，培养过夜），可使突变？稳定下来，克服表型延迟。
4、培养B常用的斜面培养基是什么？简述配制程序。
答：牛肉膏蛋白胨培养基①称量;按配方依次准确称量②融化:取少量水于烧杯中，加1%的蛋白胨，加热溶解，加0.5%的牛肉膏，加热溶解，加0.5%的NaCl,热熔，加水补充到所需体积。
③调PH至7.6左右。
④加琼脂固体2%，热熔。
⑤分装入试管，加塞，包扎，高压灭菌⑥搁置斜面（斜面长度不超过试管一半）⑦无菌检查：将灭菌的培养基放入37°C的温室中培养24-28h，以检查灭菌是否彻底。
5、啤酒酵母在分批发酵中的生长曲线分哪几个时期？在菌种扩培时，哪个时期做种子？为什么？答：延滞期，对数生长期，稳定期，衰退期。
对数期做种子。
利于缩短延滞期。
6、菌种衰退的根本原因？防治措施？答：？的自发突变。
措施：①减少传代次数②创造良好的培养条件③采用不易衰退的菌种传代④采取良好的菌种保藏措施4、菌种衰退的根本原因，防止措施。
如何区分衰退和饰变？答：根本原因：？的自发突变。
（②传代次数的影响，是负突变株比例占优势，③培养条件）防止措施见上题。
区分：衰退：指随着菌体的不断生长，负突变菌株的数量占整个菌体数量的比例增大，最终导致菌株的生产性能大幅下降的现象。
①原有形态性状不典型，②生长速率下降③代谢产物生产力下降④对宿主侵袭力下降⑤抵抗力下降饰变:遗传物质结构不发生变化，而只在转录与转译水平上的表型变化，可以同一条件继续培养，观察子代的情况。
饰变特点：暂时性，不可遗传性，表现为全部个体的行为。
变异：遗传性，群体中极少数个体的行为。
5、gone？突变的特点？答：①自发性②非对应性③稀有性（突变率10-6~10-9）④独立性⑤可诱发性（升高10~10^5倍）⑥稳定性⑦可逆性（原养型<=>突变型）6、v（第三张）的特点。
答：①形体微小，能通过细胞滤器（0.22um），电子显微镜下才能看见②不具有细胞机构，主要成分NA，Pr③V只含有一种核酸，DNA 或RNA④无核糖体，即无产能酶系，也无Pr,NA合成酶系，专性活细胞内寄生⑤无个体生长，也不进行二分裂，以NA,Pr等“元件”装配，实现大量繁殖。
⑥离体下以无生命的生物大分子状态存在⑦对大多数抗生素不敏感，对干扰素敏感。
7、？月元病毒的致病机理。
答：月元病毒是一种Pr侵染颗粒，仅有Pr组成，称作PrP。
细胞型PrP----PrP^c对蛋白酶敏感，无凝聚能力，而致病型PrP---PrP^sc对蛋白酶有一定抗性，可凝集成纤维状组织，PrP^sc进入细胞后，与PrP^c结合，形成PrP^sc---PrP^c复合体，PrP^c构型发生改变，转化成PrP^sc，PrP^sc数量呈指数增加，其潜伏期长，对中枢神经损害严重。
估菌计数法及其特点（笔记P31）乳糖操纵子（P30）1、2、伴孢晶体？它在何种B中产生？答：伴孢晶体：苏云金芽孢杆菌等少数芽孢杆菌在其形成芽孢的同时，会在芽孢旁形成一颗菱形或双锥形的碱溶性蛋白晶体（δ肉毒素）称为伴孢晶体。
对约200种昆虫无为鳞翅目幼虫有毒杀作用，可制成B杀虫剂。
3、霉菌菌落的特征？答：①质地疏松，呈絮状，网状，绒毛状，地毯状。
②形态大，分为局限性生长（青、曲）和蔓延性生长（根毛）③菌落干燥（孢子）④颜色丰富，正反颜色常不一致，中心与边缘常不一致。
⑤各种霉菌，在一定培养基上，形成的菌落大小，形状，颜色相对稳定，为分类依据之一。
4、利用磷酸盐或碳酸钙如何维持PH稳定性？答：①磷酸氢二钾略呈碱性，磷酸氢二钾略呈酸性，两物质以等摩尔浓度溶液PH为6.8，其缓冲能力一般在6.4~7.2范围内有效。
磷酸氢二钾+H阳离子---->磷酸氢二钾+K阳离子磷酸二氢钾+K阳离子+OH- →磷酸氢二钾+H2O②大量产酸的菌株，加入碳酸钙调节，碳酸钙难溶于水，不会使培养基PH过度升高，但可不断中和微生物产的酸，同时放出二氧化碳，而降培养基PH控制在一定范围。
5、单倍体酵母细胞经??（第5张）诱变后，得到一系列的突变株，欲从中分离筛选出一株（Leu-),请设计合理的试验程序。
答：淘汰型野生型→（制霉菌素法）→检出→鉴定（滤纸片法）将单倍体酵母细胞突变株，制成菌悬液，均匀涂布于完全培养基上，长成单个菌落之后，以逐个检出的方式接种于完全培养基上，并影印到基本培养基上，在适宜条件下培养一段时间，在完全培养基上生长，而在基本培养基上不生长的，即为营养缺陷型菌株。
将此菌株检出离心，水洗之后制成适当浓度的菌悬液，与基本培养基均匀混合后，倾注于平板中，干燥凝固之后，在板上划分几个区，在区中加入蘸有色AA的滤纸片，经培养后，在纸片周围有浑浊的生长圈的，说明为色AA营养缺陷株。
6、MR,V.P.实验的原理。
答：MR：用来检测由G产生的有机酸，如甲酸，乙酸，乳酸等，细菌代谢糖产酸，PH降低，甲基红指示剂由橙色（PH=6.3）变成红色（PH=4.2）大肠杆菌---阳性：利用乳糖产生乳酸，培养后PH<4.5大肠杆菌---阴性：早起产有机酸，后转化有机酸→乙醇，丙酮酸。
②V.P. 用来测定细菌利用G产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。
丙酮酸经缩合→乙酰甲基甲醇（经碱性、氧化）→二乙酰。
二乙酰与蛋白胨中精AA中胍基作用，生成红色化合物，产气肠杆菌---阳性，大肠杆菌---阴性。
7、什么叫生长曲线？单细胞微生物的典型生长曲线分几期？划分依据？答：生长曲线：将少量纯种单细胞微生物接种到定量的液体培养基中，定时取样测定细胞数量，以培养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标作图，得到一条反应在整个培养期间菌数变化规律的曲线。
分为延滞期，对数期，稳定期，衰亡期。
根据生长速率常数划分，即单位时间内分裂次数的不同。
8、为什么诱变时，要制成充分分散的单细胞或单孢子悬液？对放线菌进行诱变育种时，宜处理其孢子还是菌丝细胞？为什么？答：使每个细胞均匀接触诱变剂，减少表型延迟现象，并避免长出不纯菌落。
多使用单核无性孢子，由于孢子生理上处于休眠状态，单核区基中了大部分的DNA，减少分离表型延迟，提高突变效果。
培养基原则：①目的明确②适宜的营养物质③浓度及配比合适④控制PH条件⑤控制氧化还原电位⑥原料来源经济节约⑦灭菌处理1、青霉素的作用机制？答：原理：β-内酰胺环的结构与肽聚糖单体五肽尾末端的D-Ala-D-Ala二肽结构相近，因而可竞争性的抑制转肽酶的活性，抑制单体间交联，形成缺损的CW。