第二页：绘图
狂犬病毒包涵体
狂犬病毒包涵体 犬海马回脑组织印片 H-E染色 10 ×100倍
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细胞病变效应
正常Hela细胞
感染HSV的Hela细胞
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细胞病变效应----融合细胞
呼吸道合胞病毒感染细胞
麻疹病毒感染细胞
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细胞病变效应----包涵体
狂犬病毒包涵体 （Negri body）
取材：犬海马回脑组织印片 H-E染色 10×100
医学微生物学 第5次实验
南华大学医学微生物学教研室 病原生物学实验中心
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实验内容
病毒的分离与鉴定（录相） 病毒的电镜照片（示教） 病毒所致细胞病变（示教） 病毒血凝试验和血凝抑制试验（示教） 病毒的培养方法——观察解剖活鸡胚（示教） 医学微生物学实验考核
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（二）甲型肝炎病毒的免疫电镜照片
标本：潜伏期甲肝患者的粪便； 免疫电镜：经与甲肝病人恢复期血清
37℃30分钟后，4℃过夜,经40 000转/ 分离心，染色； 25nm左右的空心颗粒,表面附有短丝 状免疫球蛋白； 扫描电镜图300,000倍。
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试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
NS 血清
0.45 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.45 0.25 0.5
0.05 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.05 — — 弃去0.25
血清 1/10 1/20 稀释度
一、病毒的电镜照片
病毒体积很小，形态多样，必须用电子显微镜观察。 超薄切片：常用的超薄切片厚度是50-70nm。 染色方法：磷钨酸盐负染色
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（一）、脊髓灰质炎病毒的电镜照片
病毒在人胚肾细胞的胞浆中复制； 双排串珠样排列的病毒颗粒，胞浆
中有较多的核蛋白颗粒； 超薄切片，扫描电镜图90,000倍。
RBC悬液
摇匀，置室温60～90min
结果
抗体的效价如何判定？
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血凝抑制抗体的效价: 对照管均正常的条件下，不出现血凝的最高稀 释管的稀释倍数。
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四、观察解剖活鸡胚
病毒培养方法： 组织培养法 鸡胚培养法 动物接种
用鸡胚培养法培养病毒有哪些优点？
（三）腺病毒的电镜照片
用人胚肾细胞培养病毒 病毒颗粒在核内呈晶格
样排列 超薄切片，扫描电镜图
40,000倍。
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二、病毒感染所致细胞病变
细胞病变(Cytopathic effect, CPE)： 细胞皱缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落； 细胞融合，形成多核巨细胞（融合细胞）； 形成包涵体：某些V感染细胞后，在胞核内或 胞浆内形成的圆形或椭圆形、嗜酸性或嗜碱性的 团块。 如：狂犬病毒包涵体（Negri Body)
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三、病毒的血凝试验和血凝抑制试验
（一）血凝试验(hemagglutinin test, HA)
原理
室温60～90min
V(HA)+鸡红细胞(HA受体）
鸡红细胞凝集
用途： *检测病毒的存在 *滴定病毒的血凝效价，大致估计病毒颗粒的数量 (1个 血凝单 位＝106病毒颗粒)
1/40 1/8 0 1/160 1/320 1/640 1/1280 血清 病毒 血球 对照 对照 对照
4单位 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 — 0.25 —
病毒悬液
0.5％鸡 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
结果判断：
+:红细胞均匀铺于管底 -:血球于管底形成一个小
团，边缘光滑圆润
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（二）血凝抑制试验（HI）
原理
V(HA)+抗HA＋鸡红细胞(HA受体） 室温60～90min
应用：
血凝抑制
检测血清中是否存在抗体及抗体的效价；
对病毒进行分型
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操作方法
0.5％鸡红细胞 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
摇匀，室温60～90min后观察结果
9
0.5
弃去0.5
0.5
结果判断：以发生50%凝集者(++)为该病毒血凝效价， 其稀释度即为一个血凝单位。
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（一）血凝试验(hemagglutinin test,HA)
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尿囊腔
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鸡胚羊膜腔接种法
接种步骤
筛选鸡蛋
38～39℃孵育 9～11d 找出气室
接种病毒液0.1～0.2mL
孵育48～72h
4 ℃冰箱过夜
胶布封口 吸出羊水
钻孔 血凝试验
作业
第一页：实验内容
病毒的分离与鉴定（录相） 病毒的电镜照片（示教） 病毒所致细胞病变（示教） 病毒血凝试验和血凝抑制试验（示教） 观察解剖活鸡胚（示教）
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（一）血凝试验(hemagglutinin test,HA)
操作方法
1
2
3
4
5
6
7
8
生理盐水
0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
1:5流感病毒液 0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
稀释倍数10 20 40 80 来自60 320 640 1280